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单抗残余DNA的探讨新进展

  来源:现代科学仪器网2017-02-16点击:459


【核心介绍】中国食品药品检定研究院​ 李萌等人,通过建立并优化物种非特异性的DOP-PCR法来进行单抗药物宿主细胞残余DNA检测(详细实验情况点此查看)。​该研究基于CHO细胞基因组DNA进行方法摸索和优化,虽然还需实际单抗制品进一步开展全面的方法学验证,从而评价该方法在单抗制品宿主细胞残余DNA检测中的可行性。但是该项研究引入了非物种特异性DOP-PCR法,为单抗制品宿主细胞残余DNA检测提供了新思路和未来发展的应用前景。  

单抗药物的质量控制中残余DNA一直是人们关注的热点。由于单抗药物通常使用连续传代细胞(如CHO,SP2/0及NS0细胞等)进行工业化生产,而该类细胞是由于调控生长的基因失调, 使得传代细胞系具有无限的寿命。因此, 理论上认为这类连续传代细胞系的DNA具有使其他细胞生长失控和产生致瘤活性的潜在能力, 需要对其DNA残留量进行质量控制。在国际上,世界卫生组织(WHO)也发布了大量有关残余DNA的技术文献,从而指导残余DNA的质量控制。

目前关于外源性DNA残留检测,各国药典收录的附录方法不尽相同:《中国药典》(ChP)收录了地高辛杂交法和荧光染色法,《美国药典》(USP)收录了定量PCR法, 而《欧洲药典》(EP)只收录了DNA杂交法,具体见表1。DOP-PCR,又称简并引物PCR,是引物为5`Tag-Nx-XXXXXX 3`(Nx为x个随机碱基,XXXXXX为6个固定碱基,该引物又称随机引物)的定量PCR。此类PCR先利用随机引物进行5轮非严谨性扩增,借以增加模板的量,所得产物随后进行40轮严谨性扩增,并进行荧光定量,检测模板DNA浓度。它的特点是具有物种非特异性,无需针对某物种的富含DNA重复序列设计特异性引物,并且是对全基因组扩增而非富含序列的扩增。该方法常用于全基因组测序,也可用于未知病毒检测和法医学痕量分析。

表1 各国药典残余DNA检测方法的收录情况


药典

中国药典

美国药典

欧洲药典

地高辛杂交法

收录

收录

荧光染色法

收录

定量PCR

收录

中国食品药品检定研究院 李萌等人,通过建立并优化物种非特异性的DOP-PCR法来进行单抗药物宿主细胞残余DNA检测(详细实验情况点此查看)。该研究基于CHO细胞基因组DNA进行方法摸索和优化,虽然还需实际单抗制品进一步开展全面的方法学验证,从而评价该方法在单抗制品宿主细胞残余DNA检测中的可行性。但是该项究引入了非物种特异性DOP-PCR法,为单抗制品宿主细胞残余DNA检测提供了新思路和未来发展的应用前景。

(资讯来源:《现代科学仪器》期刊,由“现代科学仪器网”官方发布,转载请注明来源)


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