高效液相色谱法测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量
摘要：目的用高效液相色谱法测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量。
方法色谱柱Diamonsil－C18色谱柱；流动相为甲醇?0.1%磷酸（7∶93）；流速0.8 ml/min；柱温35℃；检测波长为270 nm。结果没食子酸在0.012 5～0.062 5 μg范围内，r=0.999 1（n＝5），线性关系良好，平均回收率为99.52%，RSD=0.56%。结论该测定方法简便、准确，可用于提高百癣夏塔热胶囊的质量标准。
百癣夏塔热胶囊是由原收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》维吾尔药分册中的百癣夏塔热片的基础上改剂而得，本药由地锦草、芦荟、诃子肉，毛诃子肉、司卡摩尼亚脂、西青果制得。用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣、银屑病、过敏性皮炎、带状疱疹、痤疮等。原标准无含量测定相，吴韬［1］对其质量标准进行了研究，在原标准的基础上增加对地锦草、司卡摩尼亚脂的TLC鉴别，并采用HPLC测定了芦荟苷的含量，但未见对其中没食子酸含量测定的报道，而处方中诃子肉，毛诃子肉、西青果的主要有效成分均为没食子酸，因此我们用高效液相色谱法测定了百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量，作为控制诃子等的限量。经方法学考察表明：该含量测定方法操作简单，重现性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器岛津LC－10A高效液相色谱仪；岛津SPD－10A紫外检测器、2010双通道色谱工作站；Diamonsil－C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；KQ?250D数控超声波清洗器。
1.2 试药甲醇（色谱纯）；二蒸水；没食子酸由中国生物药品检验所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱Diamonsil－C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为甲醇?0.1％磷酸（7∶93）；流速0.8 ml/min；柱温35℃；检测波长为270 nm。
2.2 供试品溶液的制备取本品内容物0.1 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加甲醇约30 ml，超声15 min，加甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取2 ml置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静置，取上清液，以0.45 μm 微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。
2.3 对照品储备溶液的制备精密称取2.50 mg没食子酸置50 ml容量瓶中，加甲醇25 ml溶解，溶解后用甲醇定容至刻度，制成对照品储备溶液。
2.4 线性关系的考察0.050 mg/ml的对照品贮备液,摇匀。精密吸取该贮备液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。吸取上述各溶液,分别进样10 μl,以质量浓度(P)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,进行线性回归，得回归方程Y=4 140 496 X+928.38，r=0.999 1，结果表明没食子酸进样量在0.012 5～0.062 5 μg之间线性关系良好。
2.5 精密度实验取3.75 μg/ml的没食子酸对照品溶液，连续进样6次，10 μl/次，峰面积为146 573.0，145 346.0，146 068.5，146 058.5，146 159.4，145 527.1，RSD=0.31%。
2.6 重复性实验取同一批号样品（20031105）平行取样，照“2.2”操作制成6个供试液，每次进样10 μl，测得样品含量（mg/g）分别为9.524，9.559，9.577，9.415，9.340，9.551，平均含量为9.494，RSD=1.00%。
2.7 稳定性实验同一批号（20031105）样品制成供试液，分别取放置4，8，12，16，20，24 h的供试品溶液进样，每次10 μl，峰面积分别为143 171.7，142 965.4，142 934.3，141 443.1，141 861.6，143 356.3，RSD=0.55%。
2.8 回收率实验精密称取供试品(20031107)约1.85 g,共6份,分别置100 ml容量瓶,每组分别加入没食子酸对照品溶液(4.028 mg/ml)1，2，3 ml,加甲醇定容至刻度,分别吸取上述溶液1 ml置50 ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀, 静置，取上清液0.45 μm微孔滤膜过滤，进样10 μl,测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量，计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果 编（略）
2.9 10批样品测定10批样品平行取样，照“2.2”操作制成10个供试品溶液，分别进样10 μl，用外标法测定，以峰面积计算含量。结果见表2。
3 讨论
3.1 当进样的供试品中没食子酸量在0.15 μg以上时，供试品的没食子酸峰型差，理论塔板数较低，在3 000左右；而对照品无此现象，理论塔板数可达到10 000以上，我们认为这可能是由色谱柱对百癣夏塔热胶囊中其它成份的吸附影响色谱柱对没食子酸的吸附而造成。
表2 百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量测定结果（略）
3.2 报道测定没食子酸含量有多种流动相系统，我们选用几种对没食子酸进行测试，有的结构复杂（乙腈－三乙胺调pH为3的0.1％磷酸盐缓冲液），有些不够稳定（冰醋酸－水），我们试用乙腈－0.1％磷酸系统也可准确测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量，但从经济方面考虑，最终确定本方法。
方法色谱柱Diamonsil－C18色谱柱；流动相为甲醇?0.1%磷酸（7∶93）；流速0.8 ml/min；柱温35℃；检测波长为270 nm。结果没食子酸在0.012 5～0.062 5 μg范围内，r=0.999 1（n＝5），线性关系良好，平均回收率为99.52%，RSD=0.56%。结论该测定方法简便、准确，可用于提高百癣夏塔热胶囊的质量标准。
百癣夏塔热胶囊是由原收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》维吾尔药分册中的百癣夏塔热片的基础上改剂而得，本药由地锦草、芦荟、诃子肉，毛诃子肉、司卡摩尼亚脂、西青果制得。用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣、银屑病、过敏性皮炎、带状疱疹、痤疮等。原标准无含量测定相，吴韬［1］对其质量标准进行了研究，在原标准的基础上增加对地锦草、司卡摩尼亚脂的TLC鉴别，并采用HPLC测定了芦荟苷的含量，但未见对其中没食子酸含量测定的报道，而处方中诃子肉，毛诃子肉、西青果的主要有效成分均为没食子酸，因此我们用高效液相色谱法测定了百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量，作为控制诃子等的限量。经方法学考察表明：该含量测定方法操作简单，重现性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器岛津LC－10A高效液相色谱仪；岛津SPD－10A紫外检测器、2010双通道色谱工作站；Diamonsil－C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；KQ?250D数控超声波清洗器。
1.2 试药甲醇（色谱纯）；二蒸水；没食子酸由中国生物药品检验所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱Diamonsil－C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为甲醇?0.1％磷酸（7∶93）；流速0.8 ml/min；柱温35℃；检测波长为270 nm。
2.2 供试品溶液的制备取本品内容物0.1 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，加甲醇约30 ml，超声15 min，加甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取2 ml置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，静置，取上清液，以0.45 μm 微孔滤膜滤过后，作为供试品溶液。
2.3 对照品储备溶液的制备精密称取2.50 mg没食子酸置50 ml容量瓶中，加甲醇25 ml溶解，溶解后用甲醇定容至刻度，制成对照品储备溶液。
2.4 线性关系的考察0.050 mg/ml的对照品贮备液,摇匀。精密吸取该贮备液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。吸取上述各溶液,分别进样10 μl,以质量浓度(P)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,进行线性回归，得回归方程Y=4 140 496 X+928.38，r=0.999 1，结果表明没食子酸进样量在0.012 5～0.062 5 μg之间线性关系良好。
2.5 精密度实验取3.75 μg/ml的没食子酸对照品溶液，连续进样6次，10 μl/次，峰面积为146 573.0，145 346.0，146 068.5，146 058.5，146 159.4，145 527.1，RSD=0.31%。
2.6 重复性实验取同一批号样品（20031105）平行取样，照“2.2”操作制成6个供试液，每次进样10 μl，测得样品含量（mg/g）分别为9.524，9.559，9.577，9.415，9.340，9.551，平均含量为9.494，RSD=1.00%。
2.7 稳定性实验同一批号（20031105）样品制成供试液，分别取放置4，8，12，16，20，24 h的供试品溶液进样，每次10 μl，峰面积分别为143 171.7，142 965.4，142 934.3，141 443.1，141 861.6，143 356.3，RSD=0.55%。
2.8 回收率实验精密称取供试品(20031107)约1.85 g,共6份,分别置100 ml容量瓶,每组分别加入没食子酸对照品溶液(4.028 mg/ml)1，2，3 ml,加甲醇定容至刻度,分别吸取上述溶液1 ml置50 ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀, 静置，取上清液0.45 μm微孔滤膜过滤，进样10 μl,测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量，计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果 编（略）
2.9 10批样品测定10批样品平行取样，照“2.2”操作制成10个供试品溶液，分别进样10 μl，用外标法测定，以峰面积计算含量。结果见表2。
3 讨论
3.1 当进样的供试品中没食子酸量在0.15 μg以上时，供试品的没食子酸峰型差，理论塔板数较低，在3 000左右；而对照品无此现象，理论塔板数可达到10 000以上，我们认为这可能是由色谱柱对百癣夏塔热胶囊中其它成份的吸附影响色谱柱对没食子酸的吸附而造成。
表2 百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量测定结果（略）
3.2 报道测定没食子酸含量有多种流动相系统，我们选用几种对没食子酸进行测试，有的结构复杂（乙腈－三乙胺调pH为3的0.1％磷酸盐缓冲液），有些不够稳定（冰醋酸－水），我们试用乙腈－0.1％磷酸系统也可准确测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸的含量，但从经济方面考虑，最终确定本方法。
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