高效液相色谱法测定氨咖敏片的含量

　

氨咖敏片为氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏的复方制剂。国家药品标准用化学分析法测定氨基比林、咖啡因含量，操作繁琐、费时，不适合对大批量样品的分析。而马来酸氯苯那敏不定量。本文用高效液相色谱法，不需分离，测定3种成份的含量，简单，快速，专属性强，结果准确。 
1 仪器药品及试剂 
P200高效液相色谱仪，UV200紫外检测器，EC2000色谱工作站。氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯，乙腈、十二烷基硫酸钠、磷酸、三乙胺为分析纯。氨咖敏片(市售品)。 
2 氨基比林和咖啡因的测定 
2．1 色谱条件与系统适应性试验 
色谱柱：Hypersil Cl8(4.6mm×200mm，5μm)，流动相：甲醇-水(52：48)，流速：0.8ml/min，检测波长为273nm，进样量：20μl。理论板数按氨基比林计算应不低于1500。外标法峰面积定量。 
2．2 线性关系实验 
精密称取105℃干燥恒重的咖啡因和40℃减压干燥恒重的氨基比林对照品适量，分置量瓶中，用水溶解并稀释成10、50、100、150、200、250、300μg/ml，各精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。经过线性回归处理，结果表明：氨基比林和咖啡因在10～0.30μg/ml范围内线性关系均良好，回归方程为A=6.552×lO000C一3.400×100000和A=6.452×lO000C一2.025×100000，相关系数分别为：0.9999、0.9998，n=7。 
2．3 重复性实验 
分别取2．2项下浓度为150μg/ml 的氨基比林和咖啡因溶液，各精密量取20 ，按上述色谱条件测定，重复测定10次，氨基比林峰面积的RSD=0.1％，咖啡因峰面积的RSD=0.2％。 
2．4 稳定性实验 
分别取2．2项下浓度为150μg/ml 的氨基比林和咖啡因溶液，室温下放置2、4、6、8、10小时后，各精密量取2Oμl，按上述色谱条件测定，结果氨基比林峰面积的RSD=0.2％，咖啡因峰面积的RSD=0.2％。 
2．5 专属性实验 
按处方称取辅料适量，置量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，按2．1色谱条件测定，记录色谱图，结果无干扰。 
2．6 回收率试验 
精密称取40℃减压干燥恒重的氨基比林和105℃干燥恒重的咖啡因、马来酸氯苯那敏对照品：0.1000g、0.0100g、0.0010g及辅料适量置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取20μl，按上述色谱条件测定，结果氨基比林的回收率分别为99.5％ ，RSD=0.3％，咖啡因的回收率为99.6％，RSD=0.2％，n=6。 
2．7 样品测定 
取氨咖敏片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于氨基比林0.1g)，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，一加水稀释至刻度，摇匀。精密量取20μl，按上述色谱条件测定，本法与国家药品标准方法测得结果比较，经t检验，无显著性差异(P>0.05)。 

 

3 马来酸氯苯那敏 
3．1 色谱条件与系统适应性试验 
色谱柱：Shim-pack Vp-ODS(4.6mm×200mm，5μ)，流动相：乙腈-0.3％十二烷基硫酸钠溶液-磷酸(60：40：0.02)(用三乙胺调pH值至3.3±0.1)，流速：0.8ml/min，检测波长为210nm，进样量：20μl。理论板数按氯苯那敏计算应不低于2000。外标法峰面积定量。 
3．2 线性关系实验 
精密称取105℃干燥恒重的马来酸氯苯那敏对照品适量，分置量瓶中，用水溶解并稀释成l0、20、30、40、50、60、70μg/ml， 各精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，经过线性回归处理，结果表明：马来酸氯苯那敏在l0～70μg/ml 范围内线性关系良好，回归方程为A=7.026× lO000C一2.052×l00000，相关系数为：0.9999，n=7。 
3．3 重复性实验 
取3．2项下浓度为40μg/ml的马来酸氯苯那敏溶液，精密量取20μl，按上述色谱条件测定，重复测定l0次，马来酸氯苯那敏峰面积的RSD=0.3％ 。 
3．4 稳定性实验 
取3．2项下浓度为40μg/ml 的马来酸氯苯那敏溶液，室温下放置2、4、6、8、10小时后，精密量取20μl，按上述色谱条件测定，结果马来酸氯苯那敏峰面积的RSD=0.5％。 
3．5 专属性实验 
按处方称取辅料适量，置量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl，按3．1色谱条件测定，记录色谱图，结果无干扰。 
3．6 回收率实验 
精密称取40℃ 减压干燥恒重的氨基比林和l05℃干燥恒重的咖啡因、马来酸氯苯那敏对照品：0.2750g、0.0225g、0.0030g及辅料适量，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25ml，振摇溶解，滤过，精密量取续滤液5ml，置l0Inl量瓶中，加0.3％十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取20μ1，按上述色谱条件测定，结果马来酸氯苯那敏的回收率为99.3％，RSD=0.2％，n=6。 
3．7 样品测定 
精密称取2．7项下细粉适量(约相当于马来酸氯苯那敏3mg)，置具塞锥形瓶中，同3．6项下操作。