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反相高效液相色谱法测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量

2008-03-27点击:248
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摘要:目的:测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量,以控制制剂质量。方法:反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。十八烷基键合硅胶为固定相,以乙腈:水(15:85)为流动相,检测波长为243nm。结果:方法准确可靠。重现性好。结论,可用于制剂质量控制。 
    关键词:养肝澳平合剂;反相高效液相色谱法;芍药苷 
    养肝澳平合剂是我院验方,临床使用1O余年,效果显著。其主要由当归、丹皮、赤芍、茵陈、丹参、郁金、砂仁等13味中药精制而成。具有养血、活血、凉血理气、清热解毒等作用,主治肝炎。经预试及第1阶段临床总结ALT复常率71.1%,GGT复常率58.1%,HBeAg转阴率8O%。丹皮、赤芍为其中君药,而芍药苷为丹皮、赤芍的主要有效成分。故选择芍药苷为控制本品质量的指标成分,采用反相高效液相色谱法测定养肝澳平合剂中芍药苷的含量。 
    1 仪器与试药 
    1.1 仪器Waters高效液相色谱仪;Resolve ODS-Cl8柱;486可调紫外检测仪;U6K进样器;H66025T型超声清洗机;十万分之一电光天平(德国sartorius);微孔滤膜(O.45μm)。 
    1.2 试药养肝澳平合剂(本院制剂室提供,批号为020821、030228,031021.040312),芍药苷对照品,分装号为736-9417购于中国药品生物制品检定所,所用药材均购于南京市药业股份公司,所用试剂均为分析纯。 
    2 方法与结果 
    2.1 色谱条件的选择 
    以十八烷基键合硅胶为填充剂。流动相为乙腈:水(15:85),检测波长243nm.流速为1.0ml/min。 
    2.2 标准曲线的绘制 
    精密称取干燥至恒重的芍药苷对照品5.12 mg,置25 ml量瓶中.加甲醇溶解并稀释至刻度.摇匀,即得。精密量取此液2.5,5.0,10,15,2O,25m1.照上述色谱条件测定。结果表明芍药苷峰面积积分值y与浓度X呈良好的线性关系。回归方程为Y=1.00×1000000000X+3.45×1O0000相关系数r=0.9997(线性范围0.512~5.12mg)。 
    2.3 样品溶液的制备与测定 
    精密量取养肝澳平合剂5m1.置三角烧瓶中。以甲醇为溶媒.超声提取4次。加甲醇15ml/次。提取l5min.过滤、合并虑液于蒸发皿中,水浴蒸去甲醇,残渣再加乙腈:水(15:85)溶解并转移至25 ml溶量瓶中。继续加乙腈:水(15:85)稀释至刻度。摇匀。用微孔滤膜(O.45m1)滤过,取续滤液即得。吸取样品溶液10ml注入HPLC仪.测定不同批号合剂中芍药苷含量。 
    2.4 回牧率测定 
    精密量取已知含量的养肝澳平合剂5ml。共5份,每份精密加入芍药苷适量,用样品溶液制备方法制备并依法测定。 
    2.5 精密度实验 
    精密吸取2.3项下制备的供试品溶液1Om1.注入HPLC仪。测得芍药苷峰面积积分值相对偏差(RSD)为1.35%。 
    2.6 重现性实验 
    精密吸取2.3项下制备的供试品溶液10μ1注入HPLC仪测定。 
    3 讨论 
    经过实验采用反相高效液相色谱法测定.经加样回收实验及重现性实验取得较好效果。从4次样品测定可看出,芍药苷(C23H28011)最高为0.64mg/ml。最低为0.46mg/m1.建议该制剂芍药苷的含量不低于0.4Omg/ml。该方法具有分离子.灵敏度高、准确度高等特点,可以作为含芍药苷有效成分中药制剂的质控标准。


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