测定银杏提取物中萜内酯的含量

银杏(GinkgobilobaL.)提取物中含多种二萜内酯和倍半萜内酯，主要的二萜内酯有银杏内酯A、B、C、M等，倍半萜内酯有白果内酯(Bilobalide)。实验证明银杏内酯有其独特的生理作用和临床价值^〔1〕。有关银杏内酯的测定方法有多种^〔2～4〕，但各有其局限性。本文建立了较为简单的含量测定的有效方法。
1　仪器和试药 1.1　仪器　日本岛津LC－10AD高效液相色谱仪；WatersR－401示差折光检测器；7725i进样阀；CR－6A色谱数据处理机。
1.2　试药　银杏内酯A、B对照品由Sigma公司提供；银杏内酯C、白果内酯由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为HPLC级，浙江临海有机化工厂提供；四氢呋喃等其它试剂均为分析纯。
2　实验方法和结果 2.1　高效液相色谱条件　流动相：甲醇－水－四氢呋喃(20∶75∶5)，示差折光检测器灵敏度ATTEN=4，流速：1.0ml/min，色谱柱：YWG－C18(4.6×150nm，10μ)，进样量50μl。
2.2　标准曲线制备　精密称取银杏内酯A、B、C、白果内酯对照品，用甲醇配制成约5mg/ml的混合对照溶液，稀释成1、2、3、4mg/ml。按上述分析条件，以浓度对峰面积作图，相关系数均在0.99以上，可用于含量测定。
2.3　供试品的制备　精密称取银杏提取物约500mg(视含量高低而定，约相当于总内酯30mg)，置50ml具塞三角瓶中，精密加入醋酸乙酯25ml，超声波处理10min，放冷，过滤，精密量取续滤液15ml，通过装有1.0g聚酰胺的小柱，控制流速约为1ml/min，继续用醋酸乙酯20ml流过小柱，合并醋酸乙酯液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.4　测定方法　分别取对照溶液和供试品溶液各50μl，进样测定，根据外标法计算含量即得。
2.5　稳定性试验　取样品溶液，进行稳定性试验，测定结果表明在48hr之内各内酯色谱峰面积无明显改变。
2.6　样品测定结果　6批银杏提取物样品测定结果见附表，对照品和供试品色谱图见附图。

附表　含量测定结果