RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量

提要　采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷的含量，以μ-Bondapak C18柱(10 μm，4.6 mm×250 mm)为固定相，2%甲醇的乙腈溶液-0.1% 磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相进行测定，紫外检测波长284 nm，平均回收率为99.95%，RSD=0.93%(n=6)。 
天乐口服液是由太子参、白术、陈皮等10味药材制成的复方制剂，具健脾开胃，消食导滞之功效，用于小儿脾胃虚弱、厌食等症。实验采用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，被测组分分离完全，测定结果准确、可靠。

1　实验部分 
1.1　仪器与试药 
　　日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见检测器，C-R3A数据处理机；岛津UV-260型可见紫外分光光度计；TGL-16B高速台式离心机。橙皮苷对照品(自制，含量99.52%)；乙腈(色谱纯，上海生化化工助剂厂)；其余化学试剂均为分析纯。
1.2　检测波长的选择 
　　取橙皮苷对照品，用所选流动相作溶剂，制成适宜浓度，在200～400 nm波长范围内测定吸收光谱，橙皮苷在流动相中的最大吸收波长为284 nm。 
1.3　色谱条件 
　　经多次试验，选择μ-Bondapak C18柱(10μm,4.6 mm×250 mm，大连物化所)；以2%甲醇的乙腈溶液-0.1%磷酸和0.1%三乙胺的水溶液(20∶80)为流动相；流速1.2 ml/min；柱温40℃；检测波长284 nm。 
　　在上述条件下由橙皮苷对照品，缺陈皮供试品(空白)、及天乐口服液供试品的色谱图可见，被测成分分离完全，供试品中共存组分不干扰橙皮苷的测定。

1.4　标准曲线测定 
1.4.1　对照品溶液的配制　取橙皮苷对照品约10 mg，精密称定，置200 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用甲醇稀释成每1 ml中含6、12、18、24、30 μg橙皮苷对照品的溶液，经高速离心后即为对照品溶液。
1.4.2　标准曲线的测定　取不同浓度的对照品溶液，进样20 μl，记录色谱图。以峰面积与浓度绘制标准曲线，其回归方程为：
y=1897.9+38397.6x　r=0.9999(n=6)。 
　　结果表明，橙皮苷在6～30 μg/ml浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。
1.5　回收率试验 
　　分别取已测定含量的供试品6份，各加入一定量的橙皮苷标准溶液，按上述供试品的测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。
1.6　精密度考察 
　　取橙皮苷对照品溶液20 μl，照上述色谱条件，按每次测定的峰面积值计算，测定结果为218090、217454、218173、219925、220323，平均峰面积值为218793，RSD=0.57%(n=5)。

1.7.1　供试品溶液的制备　精密量取供试品溶液1 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，经高速离心即为供试品溶液。
1.7.2　分离测定　取供试品溶液，进样20 μl，在上述条件下测定，记录色谱图和橙皮苷峰面积，按回归方程或随行标准计算供试品中橙皮苷含量.
2　小结 
　　以上试验对检测条件、回收率及供试品的稀释液等进行了探索。用RP-HPLC测定天乐口服液中橙皮苷含量，操作简便，供试品中共存组分不干扰测定，结果准确可靠，可作为该制剂中橙皮苷的质量控制方法。