HPLC法检查甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF

摘要　采用高效液相色谱法测定甲硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛，以C18为固定相，以甲醇－0.2%磷酸溶液(25∶75)为流动相，检测波长为284 nm，平均回收率为99.2%(RSD＝0.61%)。《中国医院制剂规范》〔1〕收载的甲硝唑葡萄糖注射液项下5-羟甲基糠醛(5-HMF)检查要求该品1∶25稀释后在284 nm波长处吸收度不得大于0.25。但实验证明，按上法进行甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF检查，其吸收度远大于0.25(1.50以上)。因为甲硝唑在284 nm处有吸收。中国药典1995年版〔2〕对甲硝唑葡萄糖注射液尚未规定5-HMP的限量检查〔2〕。为保证用药安全，本文建立了高效液相色谱法测定甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF的含量，可消除甲硝唑的干扰。现报道如下。

1　仪器与试药
1.1　仪器　Waters 501泵，484检测器，7725进样器(美国)。
1.2　试药　甲硝唑(浙江可立思安制药公司)；5-羟甲基糠醛(美国Sigma公司，H9877)；甲硝唑葡萄糖注射液(浙江省新昌制药厂，971105，971213，980124，980213，980321)；甲醇(色谱纯)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱：Nova-pack C18(200 mm×4.6 mm, 4 μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(25∶75)；检测波长：284 nm；流速：1.0 ml/min。
2.2　试液的配制　精密称取5-HMF适量，加水溶解成0.5 mg/ml的溶液为5-HMF标准储备液。
2.3　标准曲线制备　精密量取5-HMF标准储备液适量，用水分别稀释成5，10，15，20，25 μg/ml的溶液；取10 μl注入色谱仪中，在上述色谱条件下测得峰面积(见图1)；以峰面积Y对浓度X绘制标准曲线，得回归方程y＝1254x＋47，r＝0.9986，表明在浓度5～25 μg/ml范围内线性良好。另取10 μl试样重复进行，峰面积RSD＝0.48%(n＝6)。
2.4　回收率测定　精密量取已测得5-HMF含量的甲硝唑葡萄糖注射液50 ml，置100 ml量瓶中，精密加入5-HMF标准储备液1 ml，加水至刻度；按样品测定项下方法，计算平均回收率为99.2%，RSD＝0.61%(n＝5)。
2.5　样品5-HMF含量检测　精密量取甲硝唑葡萄糖注射液10 μl注入色谱仪，按上述色谱条件，测得5-HMF的色谱峰面积；另精密量取5-HMF标准溶液10 μl注入色谱仪中，同法测得峰面积，按峰面积外标法计算，结果5批样品中5-HMF含量分别为6.1，8.3，8.6，10.9，14.7 μg/ml。
3　讨论　　实践证明，若生产过程不规范(如灭菌温度过高，时间过长)很容易导致5-HMF含量偏高。因此，控制甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF的限量对确保用药安全具有重要意义。