HPLC法测定紫草油中左旋紫草素的含量

摘要：目的 建立紫草油中左旋紫草素的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定紫草油中左旋紫草素的含量，色谱柱：岛津Shim-packVP-ODS柱（4.6mm×250mm）；甲醇-0.025mol/L磷酸（85：15）为流动相；检测波长：516nm；柱温：25℃；进样量：20μL。结果：左旋紫草素在11.2μg/mL～33.6μg/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9998）；平均回收率为101.3%，RSD=1.90%（n=5）。结论：该方法简便、准确，能排除其他成分的干扰，可用于紫草油的质量控制和评价。
    紫草油是我院的医院制剂，由紫草、银花藤、白芷等中药组成，具有凉血消炎的作用，临床用于烫伤的治疗，紫草为方中君药，其有效成分为紫草素，而紫草素含量的高低，直接影响其临床疗效。本实验采用HPLC法测定紫草油左旋紫草素的含量，方法简便、准确、重现性好，为控制该制剂的内在质量提供了可靠的方法。
    l仪器与试药
    1．1仪器高效液相色谱仪LC-1OA，SPD-10AVP紫外检测器(日本岛津)；CK chrom data acquieition lO 15system (美国TSP)。
    1．2试药
    左旋紫草素对照品(中国药品生物制品检定所，批号0769—9903)；紫草油(本院制剂室提供)；超纯水；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
    2方法与结果
    2．1色谱条件色谱柱：岛津Shim-packVP-ODS柱(4.6mm×250mm)；流动相：甲醇-0.025mol／L磷酸(85：15) ；流速：1.0 mL／min；检测波长：516nm；柱温：25℃；进样量：20μL(定量环)。
    2．2对照品溶液的制备 精密称取左旋紫草素对照品2.8 mg，置25mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，制成每mL含112.0μg的溶液，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液(1 12.0μg／mL)1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。
    2．3供试品溶液制备精密吸取样品10mL，置分液漏斗中，加入1％ 氢氧化钠溶液20mL振摇提取3次，每次20mL，合并碱液，加10％盐酸溶液，调pH值至酸性(pH 2.5～3.5)，用氯仿萃取4次(30，30，30，20mL)，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至25mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
    2．4线性关系考察取浓度为11.2，16.8，22.4，28.0，33.6μg／mL的对照品溶液，分别进样20μL，测得峰面积，以浓度(C)对峰面积积分值(A)进行线性回归，回归方程为A=2.521×10000C一4265，r=0.9998。表明左旋紫草素在11.2μg／mL～33.6μg／mL浓度范围内，与峰面积积分值呈良好线性关系。
    2．5精密度试验取同一份供试品溶液，每次20μL，重复进样6次，结果平均峰面积为757099，RSD=0.78％(n=6)。
    2．6稳定性试验取供试品溶液依上述色谱条件，每隔1h测含量1次(n=5)，次日测定2次，积分值无明显变化，平均峰面积为742531，RSD为1.01％(n=7)。
    2．7重复性试验取同批样品(批号020816)5份，依2．3项下方法制备，照上述色谱条件测定，结果平均含量为58.0μg／mL，RSD为0.90％ (n=5)。
    该方法符合重复性要求。
    2．8加样回收率试验精密吸取已知含量的样品溶液，精密加入一定含量的左旋紫草素对照品溶液，依法提取、进样、测定。
    2．9样品测定取4批样品各10mL，依法制成供试品溶液，均以20μL进样，分别测定吸收峰面积，外标法计算左旋紫草素含量。
    3讨论
    紫草油为油制剂，方中主药紫草的有效分为紫草素及其衍生物，属于萘醌色素类化合物。有文献报道用紫外分光光度法及薄层扫描测定紫草素的含量 ，本方法采用HPLC测定紫草油中左旋紫草素的含量，简便、灵敏、准确，重复性好，可用于本品的质量控制。样品测定结果表明，各批号紫草油中左旋紫草素含量差异较大，通过对成品颜色的观察发现，左旋紫草素含量高的成品颜色深红，而所测含量较低的成品颜色较浅，这可能与紫草原药材的质量有关，故应严格控制原药材的来源与质量，并且应加强本制剂中间产品紫草素的质量控制。