如何防止HPLC或CapLC的污染
最小化或者减少背景污染物的建议：所有的溶剂和酸、碱、缓冲盐都是化学品，没有一种是100%纯的。因此，在LC/MS中总是存在着一些化学背景。为了改善数据质量，将干扰以及背景噪音减少到最小是非常值得考虑的。在此我们给大家提出一些小建议，供大家参考。同时也欢迎您也把工作当中的经验和小窍门提供给大家，以便让更多的用户一起分享！
溶剂和添加剂:
a.使用最高纯度的试剂 – HPLC 级或更高纯度。
i.最好使用Fisher Optima grade
1.有些 HPLC 级试剂含有聚乙二醇类（PEG）化合物.紫外检测器无法检测它们的存在。
2.有些HPLC级试剂含有铁离子 (Fe+3)
ii. 水可能是污染物的一个主要来源
3.必须对在线的纯水系统(Milli-Q)进行维护。18 M欧姆的水也不是完全没有有机污染物的。
4.瓶装水不一定比Milli-Q制得的水更好，因为在瓶装水开启以后，它可能会积聚污染物。
5.不推荐在塑料容器内储存水。
6.将水通过一根干净的C18色谱柱以除去有机物质而进一步纯化，这可以通过一个高压二元梯度和一根C18的保护柱而在线进行。
b.添加剂，例如乙酸可能含有大量的铁。100ppb听起来似乎是很低的浓度，可是，100ppb＝100ng/L或者100pg/mL。
i.乙酸所形成铁的加合物会导致强的ESI+ 质谱图。
ii.甲酸已被证明含有较少的铁离子。
c.加入最低浓度的添加剂，可以减少化学背景噪音、增加信噪比和灵敏度。
2.装样品和溶剂的容器
a.瓶子和盖子，样品提取板：
i.Waters 样品瓶是经过质量控制的， 其他品牌可能没那么洁净。
ii.带垫片的样品瓶盖，因含有塑胶或者粘合剂，可能会污染自动进样器。
iii.样品提取板是塑料材质的，可能有增塑剂释出 (例如邻苯二甲酸二辛酯污染物)。
iv.样品提取板胶合金属箔片的盖子可能会有粘合剂物质流失。
b.玻璃器皿
i.用普通的洗涤剂洗涤后，玻璃器皿上可能有洗涤剂残留(聚乙二醇类化合物) 及其它 “粘性的” 物质污染
ii.应该用即将使用的流动相品质的试剂进行冲洗。
c.塑料容器或管路:
不要将溶剂或者水储存于塑料的溶器中 (因为其中会如邻苯二甲酸二辛酯污染物)。
3.护手霜 <BR>d. 含聚乙二醇类化合物、油脂、维生素等等。
e.在处理能够接触流动相或者样品的HPLC部件时，请戴手套。
4.样品以及样品基质
f.样品基质中可能含有盐和其它不期望带入的物质。当制备针头清洗液的时候，必须考虑基质的溶解性。
i.无机盐类在高有机相比例的溶液中是不溶解的，避免使用含有Na+、K+ 、PO4-3的缓冲液，因为它们是不挥发的。含NH4+ 的醋酸盐或者甲酸的缓冲液具有挥发性，并且是与MS兼容的。
ii.蛋白质 (例如组织，血液或者血清样品中的) 在高有机相溶液中(>40%)会沉淀，沉淀的蛋白质会阻塞进样器和管路，而且会吸附待测物或者污染物。
g.制备样品所用的化学品(例如：洗涤剂、盐) 等会产生出巨大的不希望出现的离子。样品净化富集的方式需要与LC/MS相协调。
h.待测物的溶解度可能是一个问题。如果样品在高有机相溶液中不溶解，在被注入初始的低有机溶剂的流动相中，一些待测物可能会在流动相中析出，并污染进样器或色谱柱，然后当下一个梯度进行时，它们可能会再溶解。
i.在进样时浓度非常大的样品可能会污染进样器。在查看样品中0.1%水平的杂质时，因需要注入足够多的样品来查看，这样的情形就很可能发生。
5.色谱柱
j.色谱柱可以表现得如同一个过滤器，颗粒、沉淀的蛋白质、及诸如此类的物质都会停留在色谱柱头并慢慢地被冲洗下来，这就会逐渐增加背景离子。
k. C18 分析柱或者Traping去盐柱将捕获来自水的疏水性化合物并会慢慢地富集它们。
i.被富集的化合物洗脱时可能作为一个明显的峰或者贯穿色谱图的以类似拖尾的形式出现。
ii.痕量富集会导致来自于溶剂或者HPLC系统的污染物的量增大。
iii.长时间的平衡C18色谱柱将富集更多的污染物。
iv.以低有机相浓度的等度流动相长时间冲洗色谱柱也会富集污染物。色谱柱应该用高有机相的溶液进行周期性的清洗。
6.PEEK 管路以及石英毛细管管路
j.PEEK 是一种塑料的聚合物。很多疏水性的化合物 (如类固醇) 可能吸附在上面，而当它们洗脱下来时，会形成污染物。
k. 石英毛细管路具有活性离子的表面，某些物质（例如一些蛋白质以及多肽）会粘附到石英上。那些能够粘附在玻璃表面的物质将都会粘附在石英毛细管上。当它们被洗脱下来时，它们将形成污染物。
7.HPLC 系统 – 在使用前，应进行清洗并测试污染物（详见37期液相色谱通讯“系统的清洗与钝化”）.
溶剂和添加剂:
a.使用最高纯度的试剂 – HPLC 级或更高纯度。
i.最好使用Fisher Optima grade
1.有些 HPLC 级试剂含有聚乙二醇类（PEG）化合物.紫外检测器无法检测它们的存在。
2.有些HPLC级试剂含有铁离子 (Fe+3)
ii. 水可能是污染物的一个主要来源
3.必须对在线的纯水系统(Milli-Q)进行维护。18 M欧姆的水也不是完全没有有机污染物的。
4.瓶装水不一定比Milli-Q制得的水更好，因为在瓶装水开启以后，它可能会积聚污染物。
5.不推荐在塑料容器内储存水。
6.将水通过一根干净的C18色谱柱以除去有机物质而进一步纯化，这可以通过一个高压二元梯度和一根C18的保护柱而在线进行。
b.添加剂，例如乙酸可能含有大量的铁。100ppb听起来似乎是很低的浓度，可是，100ppb＝100ng/L或者100pg/mL。
i.乙酸所形成铁的加合物会导致强的ESI+ 质谱图。
ii.甲酸已被证明含有较少的铁离子。
c.加入最低浓度的添加剂，可以减少化学背景噪音、增加信噪比和灵敏度。
2.装样品和溶剂的容器
a.瓶子和盖子，样品提取板：
i.Waters 样品瓶是经过质量控制的， 其他品牌可能没那么洁净。
ii.带垫片的样品瓶盖，因含有塑胶或者粘合剂，可能会污染自动进样器。
iii.样品提取板是塑料材质的，可能有增塑剂释出 (例如邻苯二甲酸二辛酯污染物)。
iv.样品提取板胶合金属箔片的盖子可能会有粘合剂物质流失。
b.玻璃器皿
i.用普通的洗涤剂洗涤后，玻璃器皿上可能有洗涤剂残留(聚乙二醇类化合物) 及其它 “粘性的” 物质污染
ii.应该用即将使用的流动相品质的试剂进行冲洗。
c.塑料容器或管路:
不要将溶剂或者水储存于塑料的溶器中 (因为其中会如邻苯二甲酸二辛酯污染物)。
3.护手霜 <BR>d. 含聚乙二醇类化合物、油脂、维生素等等。
e.在处理能够接触流动相或者样品的HPLC部件时，请戴手套。
4.样品以及样品基质
f.样品基质中可能含有盐和其它不期望带入的物质。当制备针头清洗液的时候，必须考虑基质的溶解性。
i.无机盐类在高有机相比例的溶液中是不溶解的，避免使用含有Na+、K+ 、PO4-3的缓冲液，因为它们是不挥发的。含NH4+ 的醋酸盐或者甲酸的缓冲液具有挥发性，并且是与MS兼容的。
ii.蛋白质 (例如组织，血液或者血清样品中的) 在高有机相溶液中(>40%)会沉淀，沉淀的蛋白质会阻塞进样器和管路，而且会吸附待测物或者污染物。
g.制备样品所用的化学品(例如：洗涤剂、盐) 等会产生出巨大的不希望出现的离子。样品净化富集的方式需要与LC/MS相协调。
h.待测物的溶解度可能是一个问题。如果样品在高有机相溶液中不溶解，在被注入初始的低有机溶剂的流动相中，一些待测物可能会在流动相中析出，并污染进样器或色谱柱，然后当下一个梯度进行时，它们可能会再溶解。
i.在进样时浓度非常大的样品可能会污染进样器。在查看样品中0.1%水平的杂质时，因需要注入足够多的样品来查看，这样的情形就很可能发生。
5.色谱柱
j.色谱柱可以表现得如同一个过滤器，颗粒、沉淀的蛋白质、及诸如此类的物质都会停留在色谱柱头并慢慢地被冲洗下来，这就会逐渐增加背景离子。
k. C18 分析柱或者Traping去盐柱将捕获来自水的疏水性化合物并会慢慢地富集它们。
i.被富集的化合物洗脱时可能作为一个明显的峰或者贯穿色谱图的以类似拖尾的形式出现。
ii.痕量富集会导致来自于溶剂或者HPLC系统的污染物的量增大。
iii.长时间的平衡C18色谱柱将富集更多的污染物。
iv.以低有机相浓度的等度流动相长时间冲洗色谱柱也会富集污染物。色谱柱应该用高有机相的溶液进行周期性的清洗。
6.PEEK 管路以及石英毛细管管路
j.PEEK 是一种塑料的聚合物。很多疏水性的化合物 (如类固醇) 可能吸附在上面，而当它们洗脱下来时，会形成污染物。
k. 石英毛细管路具有活性离子的表面，某些物质（例如一些蛋白质以及多肽）会粘附到石英上。那些能够粘附在玻璃表面的物质将都会粘附在石英毛细管上。当它们被洗脱下来时，它们将形成污染物。
7.HPLC 系统 – 在使用前，应进行清洗并测试污染物（详见37期液相色谱通讯“系统的清洗与钝化”）.
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