小白鼠生物样本中铂的测定方法研究

顺-双氯双氨络铂（Cis-Diaminodichloroplatin） 又称顺铂，做为重要的抗癌剂，对癌细胞有强大的杀伤力，用于头颈部癌、膀胱癌、肺癌、食管癌、恶性淋巴瘤等的治疗，在临床已有较长时间的应用。但观察表明，患者使用顺铂一段时间后对肾功能会造成一定程度的损害。为准确掌握顺铂在血液中的存在及随尿液排出的规律，了解其在肾脏中的积累情况，更好地指导临床中顺铂的合理使用，我们拟定了利用小白鼠做为受试体、观察顺铂在小白鼠体内积累与体外排出的动物试验，并采用石墨炉原子吸收法对小白鼠血清、尿样和肾皮质部中铂的含量进行了测定。

由于生物样本的复杂性及样本中铂含量极低，给应用石墨炉原子吸收光谱分析测定样本中铂含量带来一定的困难。郭军华、陈友祎曾用石墨炉原子吸收光谱法测定过患者血浆、胸水和尿中的铂^[1]，徐霞、刘兰琦采用石墨炉原子吸收法测定过妇科肿瘤患者血浆及尿中顺铂的浓度^[2]，刘正亮、王晓云等做过组织顺铂的石墨炉原子吸收法测定研究^[3]，而对小白鼠血清、尿及肾皮质部铂含量的测定至今尚未见到相关报道。本文对小白鼠生物样本中铂含量的测定方法做了研究，现报告如下：

一．             实验部分

1．  生物样本的采集方法

利用清洁饲料及水饲喂昆明种小白鼠5周后，将小白鼠按试验组与对照组分开，每组各20只。除按常规饲养外、试验组每只小白鼠从第6周开始每日注射顺铂溶液0.5ml（含顺铂30μg），连续注射7天。饲喂6周后对每只小白鼠称重并计算平均体重，试验组及对照组无明显差别。停止注射顺铂溶液1天后，对对照组小白鼠挤压采集尿样、对试验组小白鼠因肾功能受损利用膀胱穿刺采集尿样。采集尿样后再取小白鼠眼球内渍血，以1000转/分离心10分钟，收集血清并保存于4℃冰箱中。然后利用颈椎脱臼处死小白鼠、取肾皮质部样品保存在4℃冰箱中。

2．  肾皮质部样本的消化方法

称取适量肾皮质部样本放入聚四氟压力坩埚内，再加入2ml分析纯HNO₃，在室温下先静置4小时、然后拧紧坩埚盖放入烘箱中，待升温到90℃后保温1小时，再升温到120℃后再保温1小时。关闭烘箱电源、待压力坩埚自然冷却到室温后取出，准确称量消化液质量及1ml消化液质量，计算出消化液的实际体积。消化液不定容、直接用于测定。

3．  仪器与试剂

仪器：日立180-80偏振塞曼原子吸收光谱仪

铂丝 99.999% 王水溶解、配制为1000μg/ml标准储备液，测定前稀释为工作溶液。

HNO₃ 分析纯 天津化学试剂二厂

热解涂层石墨管：航天部北京材料工艺研究所

4．  原子吸收光谱分析条件

表1.  原子吸收光谱分析条件

表2.  石墨炉加热程序

二．             结果与讨论

1．  实验表明：试验组小白鼠尿样中铂含量一般只有几百ng/ml、而血清及肾皮质部消化液中铂含量一般只有几十ng/ml，选择石墨炉原子吸收光谱法测定小鼠生物样本中的铂含量，方法的灵敏度可以满足实际测定的需求。对肾皮质部消化液不定容，采取称重法计算消化液的实际体积，有效地防止了因定容稀释而造成的测定信号的降低，比较适合于生物样本中超低含量待测元素的分析。

2．  在石墨炉加热程序中，针对尿样中含盐量较高、血清中有机物含量较多及肾皮质部消化液中含酸量较高的特点，设计了二步灰化程序。利用二个斜坡升温及较长的灰化时间，较好地解决了多种生物样本中的背景干扰问题。实际测定中血清背景值仅有0.04左右、尿样背景值仅有0.12左右、肾皮质部消化液背景值仅有0.06左右，在该低背景值情况下再配合Zeeman法进行背景扣除，保证了测定的重现性，同时也避免了基体改进剂的使用，简化了实验过程。

3．  经计算，小白鼠尿样11次测定的相对标准偏差为3.00 %、肾皮质部消化液11次测定的相对标准偏差为 5.26%、血清7次测定的相对标准偏差为9.42 %，见表3。结果显示，该实验条件对小白鼠生物样本中铂含量的测定有较普遍的适用性。

表3.   小白鼠生物样本Pt测定的相对标准偏差

4．  该实验证实了顺铂对肾功能的损害作用，试验组小白鼠注射顺铂一周后，自主排尿已困难，只能采用膀胱穿刺采集尿样。此外，该实验还观察到了注射顺铂的小白鼠在肾皮质部Pt的积累及在血液中Pt的存在与变化的规律。

天津医科大学王卓等提供样品，特此致谢！

参考文献：

[1]郭军华、陈友祎. 石墨炉原子吸收光谱法测定血浆、胸水和尿中的铂.光谱学与光谱分析.1991,11(2):48-51

[2]徐霞、刘兰琦.石墨炉原子吸收光谱法测定妇科肿瘤患者血浆及尿中顺铂浓度.河南肿瘤学杂志.1996,9(5):329-330

[3]刘正亮、王晓云、许长春.组织顺铂的石墨炉原子吸收法测定.中国卫生检验杂志.2003,13(2):186