高效液相色谱新型反相柱及其在中药分析中的应用——超效柱、水相柱与浸透限制相

由于中药成分的复杂性，在用通常的反相高效液相色谱（HPLC）分析中药时常遇到一些困难，特别是对于难分离成分比较多的、强极性成分多的、以及血清中的样品的分析，通常在建立分析条件时消耗较多，但结果仍不太满意。近年来逐渐商品化的几种新型HPLC反相柱（超效柱、水相柱和浸透限制相）可能为解决这些问题提供重要支持。

超效柱是粒径小于2微米的HPLC柱，通常在1.7到1.8微米。根据van Deemter方程，此时可以在较宽流速范围内获得很高的柱效。这使HPLC更加高效和快速，是HPLC的重大进展。但正是因为粒径小，这种柱子柱压很高，需要特殊的仪器系统；而且容易受到样品溶液中可能存在的微小颗粒的损害。用于中药样品分析，可以在很短的时间内得到很高的分离度，同时也对样品的前处理提出了一定要求。图1是其用于板蓝根水煎液极性部分的谱图。

这里的水相柱是指可以使用100%纯水做流动相的柱子。通常通过在键合C18时先接上极性基团，避免了通常低于5%有机相时出现的柱“塌陷”现象，有助于强极性组分的分离。图2是用水相超效柱分离板蓝根水煎液中极性部分的结果。水相柱在使用中存在一些与普通ODS不同的地方，还需要不断积累经验。

图1 超效柱分析板蓝根水煎液的谱图                                        

 图2  水相超效柱分析板蓝根水煎液的谱图

浸透限制相(restricted access stationary)是在色谱填料的疏水层上覆盖一层亲水层, 亲水层只允许小分子组分自由进入固定相的疏水部分, 阻止了大分子物质如血清蛋白与固定相疏水部分的作用, 使小分子物质得到分离, 大分子物质随流动相流出。这样，体液(血清、血浆等)样品可以不经前处理直接进样分析。浸透限制相为中药体液样品分析提供了方便的工具。

图3 浸透限制相直接进样分析中药复方泻心汤灌胃后血浆（上）和空白血浆（下）的谱图