流动注射-化学发光法测定苄丝肼的研究

　

Study on the determination of benserazide by Flow Injection Chemiluminescence
HE Weiwei1,2, ZHOU Xingwang1, LU Jianquan1,*

1Hubei Key Laboratory of Bioanalytical Technology, Hubei Normal University, Huangshi 435002, China
2Department of Chemistry, Central China Normal University, Wuhan 430079, China

Abstract: A novel method for the determination of benserazide based on the enhancing effect of benserazide on luminol - potassium ferricyanide chemiluminescence system in alkaline solution is developed by flow-injection chemiluminescence method. The detecting parameters, such as the sampling time and dosage of luminol, potassium ferricyanide and sodium hydroxide, were optimized by orthogonal array designs. Under the optimum conditions, the emission intensity is proportional to the concentration of benserazide in the range of 0.01-1.0 μg/mL. The detection limit for benserazide (S/N=3) turned out to be 0.9 ng/mL, and the relative standard deviation for 11 determinations using a 0.10 µg/mL benserazide containing solution is 2.4%. The method was applied to the determination of benserazide in spiked urine samples and the results were satisfactory.
Key words: Flow injection -Chemiluminescence analysis; Benserazide; luminol

苄丝肼（2，3，4-三羟基苄基-D,L-丝氨酸）是一种外周多巴脱羧酶抑制剂[1]，常与左旋多巴配伍用于治疗外周组织中大量多巴胺造成的诸多不良反应[2]。
目前，苄丝肼的分析方法主要有色谱法[3]、分光光度法[4,5]、电化学方法[6]、毛细管电泳法[7]等。文献方法中有的灵敏度较低，有的线性范围较窄。化学发光分析法装置简单、背景干扰小、灵敏度高，用化学发光法测定苄丝肼的研究尚未见报道。

1. 实验部分
1.1 仪器与试剂
MPI-B型多参数化学分析测试系统（西安瑞迈电子科技公司，西安）。
鲁米诺储备液（0.01mol/L）：称取0.443g鲁米诺（Sigma，St. Louis, USA），用0.1 mol/L NaOH溶液溶解并定容至250mL，避光放置。铁氰化钾储备液（0.01 mol/L）：称取0.329g铁氰化钾，将其溶于水中配成100mL溶液。苄丝肼标准液(1.0 mg/mL）, 准确称取1.0 mg苄丝肼（Sigma, St. Louis, USA）溶解于1.0 mL pH3.50的 HCl溶液中，密封保存在4℃冰箱中。实验中所用的其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
1.2 实验方法
流路装置如图1所示，将鲁米诺溶液、铁氰化钾溶液、载流和样品泵入各自的流路，蠕动泵流速均为1.7 mL/min。样品通过六通阀进样，与发光物质混合。光信号发出后被光电倍增管收集，然后在计算机上输出。整个发光过程都是在密闭黑箱中完成。

图1 苄丝肼流动注射化学发光分析流路图
2. 结果与讨论
2.1 化学发光动力学曲线
图2显示了鲁米诺-铁氰化钾体系加入苄丝肼前后发光强度的变化。结果表明，苄丝肼对于该体系的化学发光有显著的增强作用。未加入苄丝肼的体系发光较弱，加入苄丝肼后在4.85s光强达到最大，40s后回到基线。

图2 发光体系中加入苄丝肼前(a)和后(b)的化学发光动力学曲线 实验条件:Luminol: 5.0×10-5 mol/L, K3Fe(CN)6: 5.0×10-5 mol/L, benserazide: 0.10 μg/ml, NaOH: 0.01 mol/L。
2.2 实验条件的优化
工作中，对该化学发光体系的实验条件进行了优化。结果显示，鲁米诺、铁氰化钾和NaOH的浓度分别为5.0×10-5、5.0×10-5和 0.01 mol/L时，可以得到最好和稳定的信号。同时，最佳进样时间为30s, 蠕动泵最佳转速为 20 转/min。
2.3 方法的线性范围、检测限及精密度
在最佳实验条件下，鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光强度的增大值（I）与苄丝肼质量浓度（C）在0.01-1.0 μg/mL范围内成线性关系，检出限为0.9ng/mL(S/N=3)。平行测定11次含苄丝肼0.1 μg/mL的溶液，所得结果的相对标准偏差（RSD）为2.4%。
2.4 干扰试验
对于浓度为0.1 μg/mL的苄丝肼溶液，测定的相对误差不大于5%时，1000倍的NaCl、KCl、Na2CO3、KNO3、KBr，500倍的NaHCO3，100倍的葡萄糖、蔗糖、EDTA，50倍的淀粉，20倍的果糖、维生素B6, 0.02倍的左旋多巴对试验不造成干扰。左旋多巴严重影响了苄丝肼的测定，故采用标准加入法检测加标尿样中苄丝肼的含量。
2.5 样品分析
取健康尿样，用1.0 mol/L NaOH调节pH为12.0，放置60 min后，取上层清液过滤。取1.0 mL滤液稀释至200 mL，取适量的稀释液，加入定量的苄丝肼标准液，然后采用加标回收法测定，测定结果与加入值基本一致（见表1）。
表1 加标尿样中苄丝肼含量的测定

加入量(μg /10 mL)	测得值(μg /10 mL)	回收率(%)	相对标准偏差(%, n=3)
0.1	0.091	90.6	1.47
0.5	0.522	104	2.59
1.0	1.04	104	1.51
5.0	5.15	103	1.81

参考文献
[1] 赵克健.中国化学药品大全，北京：新时代出版社, 1999,337.
[2] 仉文升,李安良. 药物化学，北京：高等教育出版社,1999,215.
[3] British Pharmacopoeia Co-beneldopa capsules. Stationary Office, London, UK,2004,2303.
[4 ] Karpińska J, Smyk J, Wołyniec E. Spectrochimica Acta (Part A). 2005, 62: 213-220.
[5] Coello J, Maspoch S, Villegas N. Talanta, 2000,53: 627-637.
[6] Wang J, Zhou Y, Liang J, He P G, Fang Y Z. Chromatographia, 2005, 61: 265-270.
[7] Fanali S, Pucci V, Sabbioni C, Raggi M A. Electrophoresis, 2000, 21: 2432-2437.