HPLC定性检测奶粉或牛奶中的三聚氰胺方法不可靠的理论分析

HPLC定性检测奶粉或牛奶中的

三聚氰胺方法不可靠的理论分析

郦韬珉

（黑龙江省乳品工业研究所，哈尔滨 150086）

    摘要：2008年9月中国乳品行业发生“911”事件以来，以国家质检总局及农业部为主的政府部门迅速出台了三聚氰胺检测方法并把此方法以最快速度向全国385家具有认正资格的检测单位下达检测任务，这种方法从理论上讲存在不可靠性，因此必须尽快用显微镜方法替代此方法。
    O 引言
    以食用三鹿牌婴儿配方奶粉为首的数千名婴儿被查出患上肾结石之后，三鹿企业的原负责人就把造成中国乳品企业这次重大安全事故的原因就归结成是少数不法奶农把三聚氰胺加入到鲜奶中造成。国家质检总局以农业部NY/T1372-2007标准为检测方法开始了全国范围了乳与乳制品中的三聚氰胺检验。与此同时，还提出了液相色谱—质谱法（HPLC-MS或GPC- GCMS）及气相色谱—质谱法（GC-MS）方法为辅助检测方法。由于此种检测方法在理论上不能成立，因此检测数据就不可能被极少数专业技术人员接受。
    1 HPLC方法的适用范围与不适合对三聚氰胺检测的原因
     HPLC是高效（压）液相色谱法的英文缩写。这种仪器是在上个世纪的60年代末开始出现，它除了可用于乳与乳制品中的氨基酸、蛋白质、脂肪酸、维生素及抗生素外，还可用于核酸及生物碱等化合物以及离子型化合物的含量分析。但这种仪器用于分析（鉴别和含量测定）三聚氰胺这种非离子型的苯衍生物从原理上就不可行。
    因为PPLC的工作原理已经告诉人们它适合于对沸点高、极性强、热稳定性差以及分子质量大的高分子有机物进行定量分析。而三聚氰胺的上述四点都不具备。特别是这种氮含量高的有机化合物不能溶于牛奶中，这一点无论从理论上还是本人亲自做的实验都证明了这点。根据实验发现，当三聚氰胺以粉末状形态（不超过以32ppm）加入到鲜牛奶中后，是以悬浮状态存在于牛乳中（非“溶解”）。这是因为牛乳中蛋白质具有胶体性质，而胶体是由胶体粒子组成，胶体粒子具有不透明性和高度分散性，而此时乳中的分散介质（一定量的三聚氢胺）在各个方向对不同胶粒撞击时产生的合力相等，因此像三聚氰胺这类不能被电离的有机物是能够悬浮在牛奶中的。还有就是牛乳是具有反光性质的不透明液体，因此它很容易被人误认为是“溶解”在奶中。
由于三聚氰胺不能溶解在牛奶中，因此含有三聚氰胺的牛奶样品就可能进行很好的前处理。而按国家质检总局2008年9月22日发布的在线前处理GPC-GCMS联用技术测定奶粉及奶制品中的三聚氰胺的前处理要求，样品（1~5g）用10倍量的二乙胺/水/乙腈提取溶剂(体积比10/40/50)时，三聚氰胺根本不能溶解这种混合溶剂中，也就更谈不到能提取出含有被测成分的混合液1.5mL。因为从二乙胺/水/乙腈的水合物分子式上看，这种溶剂呈碱性，而从三聚氰胺的化学结构看，这种物质是不能溶于碱性溶剂的。
而现在国家质检总局公布的22家乳品企业生产的婴儿奶粉检测出来的物质是尿素。因为尿素是典型的碱性物质，它不仅能很好溶于水和牛奶中，而且它还能溶于二乙胺/水/乙腈溶剂中，因此用此种方法检测出来的物质是尿素在理论上是成立的。
    2 对HPLC方法中的“三聚氰胺”色谱图分析
   从本文作者2008年9月23号在某检测单位看到的HPLC色谱图和看某检验部门在网上公布的色谱图（见图一）看，都存在着明显的不准确问题。例如：HPLC的色谱图的色谱峰在理论上乳与乳制品都是正态分布的，

但是已看到的这些图谱都不是正态分布。特别是图谱的下方发生面积重叠，由此得出样品进色谱柱与不进色谱柱回收率差别在60-110%之间变化，而且出峰时间（13.6-13.9min）也会有明显的不同。还有从国家质检总局公布的22家企业含有的三聚氰胺婴儿奶粉检测数据看也明显存在以下问题：
    1、  样品抽检数量不同时，检测数据没有可比性；
    2、  测量值必需是有效数字（也就是小数点保留位数一定是仪器精度的前一位）和标准差；
    3 检测乳与乳制品中的三聚氰胺正确检测方法介绍
    要检测乳与乳制品中的三聚氰胺最准的方法是先用红外光谱仪（振动光谱）对样品中含有的三聚氢胺的结构进行定性检测后（这种检测是非常规检测，只在极少数情况下采用），再利用普通显微镜对形态进行观察，这样就可以准确判定其是否含有三聚氰胺。显微镜法检测三聚氰胺的步骤有以下几步：第一步是从收购的牛奶底部取样；第二步是把样品用离心机离心3min；第三步是留下离心后的最后一部分（0.1ml）；第四步用吸管把收取的样品移入到载波片了；第五步是将载波片放到显微镜下用目镜16倍×物镜10倍观测，这样就可以定性检测出被检样品是否含有三聚氰胺（最小观测值0.2mg/100ml）。
    4 后记
    这次中国乳品行业发生的“911”事件后果虽然严重，但并不可怕，可怕的是中国乳业的一些专业部门和多个政府部门的有关人员无知。为了能使中国各有关部门和所有乳品及食品生产企业能从这次事件中吸取教训，就一定要把中央提出的科学发展观落到实处。所有重要岗位的人员都应该具有城实和坦率的性格，教授及研究员的质量要严格考核并做到能上能下，行政干部不要决断技术问题。另外，中国乳业协会及中国奶业协会一定要合并，而且协会性质要从管理型走向服务型，中国乳品国家技术委员会也应该在这次事件后成立。