高效液相色谱－电喷雾串联质谱联用测定植物源性蛋白中三聚氰胺残留

丁涛 1， 李建忠 2，徐锦忠 1，沈崇钰 1，吴斌 1，陈惠兰 1，李淑娟 2，刘飞 3（1. 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，南京，210001；2.中国检验检疫科学研究院，北京，100025；3. 赛默飞世尔科技（上海）有限公司）

摘要：

研究报导了高效液相色谱－电喷雾串联质谱联用（HPLC/MS/MS）测定植物源性蛋白中三聚氰胺残留的方法。三氯乙酸溶液沉淀样品中的蛋白，同时提取目标分析物，强阳离子固相萃取柱进一步富集净化后，利用电喷雾串联质谱进行检测。检测低限为0.5 μg/kg， 添加回收率84 ～ 98％之间（基质匹配曲线校正），相对标准偏差（RSD）在1.8 ％ ～ 7.4 ％。

2007年3月中旬以来，美国发生多起宠物猫、狗中毒死亡事件。美国食品药品管理局(FDA)从江苏和山东两家公司出口美国的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺成分，并初步认定为宠物食品中含有的大量三聚氰胺是导致猫、狗中毒死亡的原因。

三聚氰胺(melamine)简称三胺(结构式见图一)，是一种重要的氮杂环有机化工原料。这种化学品常被用于生产塑料、胶水和阻燃剂，在部分亚洲国家，它也被用以制造化肥。同时三聚氰胺也是一种名为灭蝇胺的农药的代谢产物[1]。

三聚氰胺是一种禁止用于宠物食品及动物饲料的化学物质，为提高宠物饲料中蛋白质测定含量而加入大量三聚氰胺后，动物食用可发生肾衰竭并导致死亡[1]。

目前测定三聚氰胺的检测方法包括气相色谱法[2]、气质联用法[3-4]、液相色谱－紫外或二极管阵列和串联质谱检测方法[5-8]。气质联用方法需要衍生化，过程比较繁琐。液相色谱配合紫外或二极管阵列由于其无需衍生化是目前最为常用的检测方法。高效液相色谱串联质谱方法灵敏度高、抗干扰能力高，在部分实验室做为确证方法使用。由于三聚氰胺一直作为灭蝇胺的代谢产物来测定，因此测定基质以农作物为主，国内外还没有关于植物源性蛋白中三聚氰胺的检测方法。本方法介绍了利用高效液相色谱－电喷雾串联质谱联用（HPLC/MS/MS）测定植物源性蛋白中三聚氰胺残留的方法。利用三氯乙酸溶液沉淀蛋白，快速高效提取蛋白中三聚氰胺残留，同时三氯乙酸又可以作为离子对试剂，在普通C18色谱柱上就可以进行高效液相色谱－串联质谱分析。经过大量样品分析结果表明，该方法快速、简单，可以作为进出口植物源性蛋白商品中三聚氰胺残留的检测和确证方法使用。

实验仪器及试剂：