离子色谱法检测奶粉和奶制品中的硝酸盐及亚硝酸盐

自然界中的硝酸盐及亚硝酸盐的形成机理：含氮有机物在微生物的作用下，可逐渐分解成氨，在氧的作用下，氨可进一步被微生物转化为亚硝酸盐和硝酸盐，硝酸盐在一定条件下亦可还原为亚硝酸盐。大量的亚硝酸盐被人体血液吸收后，可使正常的血红蛋白（二价铁）变成变性血红蛋白（三价铁），从而失去携带氧气的功能，出现组织缺氧现象；二是亚硝酸盐与蛋白质代谢的中间产物仲胺反应，生成亚硝胺，亚硝胺具有一定的致癌性。

在奶牛的喂养过程中，如果环境水源、喂养饲料的添加剂以及奶牛生长环境等硝酸盐亚硝酸盐含量过高，都会发生牛奶中的硝酸盐及亚硝酸盐的超标，随着人们生活质量的提高，牛奶及奶制品在人们日常生活中所占比重越来越大，因此，加强预防和检测牛奶及奶制品的硝酸盐污染是非常必要的。

本部分介绍了离子色谱检测牛奶及奶制品中硝酸盐、亚硝酸盐的方法，该方法对亚硝酸盐和硝酸盐检出限分别为0.05 mg/L和0.075 mg/L。

注：本方法为国标GB5009食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定中的推荐方法

样品前处理

提取：

牛奶：准确量取5 mL试样于25 mL比色皿中，加5-10 mL纯水，加入3%乙酸2 mL，摇匀超声10 min，75℃放置

5 min。采用定量滤纸初步过滤。取部分溶液于10000 rpm速度离心15 min，取上清液备用。

奶粉，奶制品：准确称取试样2.50 g，置于50 mL容量瓶中，加水40 mL，加入3%乙酸2 ml，摇匀，超声

30 min，置75℃水浴中放置5 min，用水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000 rpm离心15 min，取

上清液备用。

净化：

取滤液15 mL依次通过OnGuard II RP柱（如果氯离子大于100 mg/L，则需要依次通过OnGuard II Ag柱和Na

柱），弃去前面3 ml（1.0 cc），收集后面洗脱液待测。

OnGuard II RP柱（1.0 cc）使用前依次用10ml甲醇、10 mL水通过，活化30 min。

OnGuard II Ag柱（1.0 cc）和OnGuard II Na柱（1.0 cc）用10 mL水通过，活化30 min。

OnGuard II RP柱、Ag柱和Na柱可以用C18柱、Ag型树脂柱和 Na型树脂柱代替

色谱条件：

色谱柱：氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱，如IonPac AS11-HC 4 mm×250 mm（带IonPac AG11-HC型保护柱4 mm×50 mm）。

淋洗液：自动淋洗液发生器，浓度为6～70 mmol。或选配二元或四元梯度泵混合产生梯度程序（使用高纯的、质量浓度为50%浓氢氧化钠溶液，配制成含OH-为100 mmol/L的淋洗液，然后再进行调整稀释）。

抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器；

检测器：电导检测器，检测池温度：35℃

淋洗液流速：1.0 mL/min。

进样体积：50 μL

测定

标准曲线

移取硝酸盐和亚硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成系列标准溶液，其中由于不同样品中硝酸盐含量差别较大，故针对不同类型的样品，需制作不同标准曲线，含硝酸盐浓度为0.0、0.03、0.75、0.15、0.3、0.45、0.6mg/L或0.0， 5.0，10.0，20.0，50.0，75.0和100.0 mg/L和亚硝酸盐浓度为0.00、0.005、0.010、0.025、0.50、0.75、1.00 mg/L的混合标准溶液，用1.0mL注射器从低到高浓度依次进样，得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以硝酸盐和亚硝酸盐的浓度（μg/L）为横坐标，以峰高（μS）或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归方程。

样品测定

用1.0 mL注射器分别吸取空白和试样溶液，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据保留时间定性，分别测量空白和样品的峰高（μS）或峰面积（μS*min）。

结果计算

试样中硝酸盐或亚硝酸盐含量按式（1）计算：

    计算结果表示到小数点后两位。