人参、人参叶含量测定方法介绍

　人参为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根及根茎。人参叶为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥叶，二者均收载于2005版《中国药典》一部中。对人参和人参叶的含量测定，2005版药典均采用HPLC法，前者以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1为指标；后者以人参皂苷Rg1和人参皂苷Re为指标。现对有关含量测定方法作一介绍。

　　一、高效液相色谱法（HPLC）
　　⑴ 2005版药典人参、人参叶含量测定项：
　　人参：
    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。
0-35min：A19%，B81%；35-55min：A19→29%，B81→71%；35-70min：A 29%，B71%；70-100min：A29→40%，B71→60%。
    供试品溶液的制备：取本品粉末（过四号筛）约1克，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

人参叶：
    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸溶液（100：400）为流动相，检测波长为203nm，理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于1500。
    供试品溶液的制备：取本品粉末10克，精密称定0.2克，置索氏提取器中，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇30 ml，加热回流3小时，提取液挥干，加水10 ml使溶解，加石油醚（30--60℃）提取2次，每次10 ml，弃去醚液，水液通过D101型大孔吸附脂柱（内径1.5cm，长15cm），以水50ml洗脱，弃去水液。再用20%乙醇50ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液70ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

⑵有关液相色谱法测定人参皂苷含量的报道，大多测定一种或几种人参皂苷(如人参皂苷Re、Rgl、Rb1)的含量对人参药材及其制剂进行鉴别或定量分析。如（非药典条件）：

    徐道娟等采用HPLC法测定参芪降糖颗粒中人参皂苷Re、Rg1的含量。Agilent 1100高效液相色谱仪；色谱柱：HypersilBDS Cl8柱流动相：乙腈-0.05％磷酸溶液(100：400)，流速：0.8ml/min，柱温，30℃ ，检测波长203nm。人参皂苷Re、Rg1回归方程分别为Y=0.00183A＋0.02353 r=0.9998，Y=0.0015A－0.0053，r=0.9999，线性范围分别为：1.976- 9.880μg，0.968pg-4．840μg。样品处理方法同人参叶。
    梁宁等用HPLC法，以茶碱为内标，氨基键合相为固定相，同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1的含量。日立L-7ll0型高效液相色谱仪，日立L-7400型紫外检测器，江申色谱工作站。色谱柱为NH2P-50柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-水(80：20)，流速为1.0 mL／min，检测波长为203nm，柱温为室温。人参皂苷Rg1在8O～ 280μg／mL(r=0.999 5)，Rb1在8O～240μg／mL(r=0.999 3)线性关系良好，Rg1和Rb1加样回收率分别为97.1% 和98.4% ，RSD分别为2.44%和2.3%( n=9)。
    周迎春等采用高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1与三七皂苷R1含量。岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪；岛津SP-10AvP型紫外检测器；ANASTAR色谱工作站；色谱柱为Asahipak NH2P-50(4.6 mm ×250 mm，5μm)，固定相为氨基键合相，流动相为乙腈-水(81：19，V：V )，流速1.2mL／min，检测波长203nm，柱温：室温。

    文献报道多采用ODS柱对一种人参皂苷单体进行定量，流动相多为乙腈-水、乙腈-磷酸等系统；同时测定几种单体的一般为药典方法或为氨基柱，流动相多为为乙腈-磷酸系统，梯度洗脱法。

二、薄层扫描法
    张春桃等采用薄层扫描法测定健脾开胃颗粒剂中人参皂苷Rg1、Re的含量。双波长薄层扫描分析仪(CS*930型，日本岛津)。Rg1以氯仿-甲醇-水(25：10：1)为展开剂，Re以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃下放置下层液为展开剂；10％硫酸乙醇为显色剂，以硅胶G为吸附剂，Rg1：(入s=535nm，入R=660nm)，Re：(入s=525nm，入R=700nm)。
    钟华等采用薄层扫描法测定乳结散胶囊中人参皂苷Rb1、Rg1含量。CS-9OOO型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；定量毛细管(美国Drummond)；Larnbdal6紫外分光光度仪(PERKIN ELMER) 。展开剂：氯仿-甲醇-水(13：7：2)lO℃以下放置过夜的下层溶液。双波长反射法锯齿扫描：测定波长入s=520nm，参比波长入R=700nm；线性参数：sx=3；狭缝：1.25mm×1.25mm；灵敏度：中；步距：0.5 mm。
    何元凯采用双波长薄层扫描测定血塞通片中人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的含量。CAMAG (TLC SCNNER 3)型薄层扫描仪，CAMAG (LINO MAT IV)半自动点样仪。正丁醇-醋酸乙酯-水(4：1：5)上层溶液为展开剂。测定波长入s=535nm，参比波长入R=460nm。

    文献报道采用薄层色谱法测定人参皂苷的含量，多为对一种单体进行测定，展开系统多为氯仿-甲醇-水或氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水等。若同时分析几种，一般采用双波长扫描，效果较好。而且供试品溶液的制备是关键。有关文献报道一般采用乙醚脱脂，甲醇提取，正丁醇萃取，碱洗，水洗，上氧化铝柱等过程进行分离、纯化。其中上柱处理是除杂的主要手段，但上柱处理样品费时，操作繁琐，可能产生较大的操作误差。如果经过前期处理，薄层中干扰较少，则可以不经过上柱，同时也可以增加含量测定的准确度。

    有关人参、人参叶极其制剂的含量测定报道较多，采用的方法主要有比色法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。在这些分析方法中，比色法和分光光度法由于其专属性差、误差大，已逐渐被淘汰。现阶段较常用的是薄层扫描法和高效液相色谱法，而且，高效液相色谱法使用的频率在迅速增加。