抗风湿药酒中富马酸的鉴别及含量测定

　抗风湿药酒系国家新药[国家新药批号：(88)卫药准字Z-04]，主要为中药八角麻的酒浸剂，具有抗炎、解热、镇痛作用，对风湿、类风湿性关节炎有较好疗效。八角麻系荨麻科植物悬铃木叶苎麻Boehmeria Platanifolia Franch et Sar．的干燥地上部分，具有祛风除湿、通经止痛功能，用于风寒湿痹、筋骨酸痛、关节屈伸不利等。八角麻中抗炎有效成分主要为富马酸(Fumaric acid)、β-谷甾醇(β-sitostero1)。本实验用薄层层析法定性检验了抗风湿药酒中富马酸和β-谷甾醇的存在，并用紫外分光光度法测定了其中富马酸的含量。
    l 仪器和试药
    岛津UV-265FS 自动记录紫外分光光度仪；岛津L1—BROR L-160DTP电子天平(产地：日本)；微量进样器(产地：日本)。富马酸对照品，由中科院上海药物所提供；抗风湿药酒，河南省漯河市第二制药厂产品；硅胶G(薄层层析用)，青岛海洋化工厂产品。
    2 定性鉴别
    2．1 薄层板制备
    取硅胶G 5g，加O.5％CMC-Na溶液研磨均匀，用涂铺器铺10cm×10cm薄板，厚度O.5mm置水平桌面上晾干，用前在105℃活化lh。
    2．2 对照品溶液的配制
    取富马酸对照品1.4mg加95％乙醇5mL制成浓度O.28mg／mL溶液备用。
    2．3 样品溶液的配制
    取同一批抗风湿药酒40mL，滴加浓HC1调pH值至2，水浴蒸干，残渣加丙酮回流提取两次，每次加2OmL丙酮回流3Omin，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩至干燥，精密加入2mL丙酮溶解备用。
    2．4 薄层检验
    照薄层层析法取样品2μL、4μL、2μL、对照品lμL、2μL分别点于同一含O.3％羧甲基纤维素Na为粘合剂的硅胶G板上，展开剂：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-乙酸(30：30：40：2)，展开约9cm，取出晾干，120％烘30min挥去展开剂中的乙酸，喷O.1％溴酚蓝乙醇显色，样品溶液在与对照品溶液相应位置上应显相同颜色的一个黄色斑点。
    3 含量测定
    3．1 薄层扫描条件
    吸收峰位置确定：以乙醇为溶媒测得最大吸收峰为207nm.
    3．2 对照溶液的制备
    精密称取富马酸对照品1O.1mg于100mL容量瓶中，加95％乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL置于5OmL容量瓶中，加95％乙醇稀释至刻度，摇匀备用(1mL中含富马酸0.202mg)。
    3．3 标准曲线的绘制
    精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.O、4.O、5.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，加95％乙醇稀释至刻度，摇匀，按照分光光度法，在207nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得到标准曲线：Y=0.629X+6.9063，r=0.9992。表明富马酸在0.202～1.010mg之间，积分值与点样量线性关系良好。
    3．4 样品制备
    精密吸取40mL抗风湿药酒，置圆底烧瓶中，加浓HC1调pH值至2。水浴减压蒸干。残渣加入丙酮100mL置水浴回流O.5h，放冷、滤过，加丙酮补足容量即得。
    3．5 测定方法
    精密量取样品溶液100μL，照薄层色谱法，点于10cm×10cm硅胶G-CMC-Na板上，在样品条斑一侧1.0cm处点对照品溶液1OμL作对照，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-乙酸(30：30：40：2)展开剂，展距约9cm，取出晾干，l05℃烘30 min，取出放凉。采用盖板法，在对照点上喷0.1％溴酚蓝显色剂，刮取与对照品相应位置上的硅胶G置圆底烧瓶中；同时，刮取同一块层析板上与样品条斑等面积的硅胶G作空白对照，置另一圆底烧瓶中。两瓶分别加50mL 95％ 乙醇，精密称重，加热回流提取30min，冷后称重，加95％乙醇补回流损失的乙醇。过滤，弃去初滤液，收集滤液于50mL容量瓶中，照分光光度法测得含量。
    3．6 回收率试验
    精密吸取抗风湿药酒2OmL精密加入富马酸对照品按前述方法测定，计算回收率。结果平均回收率98.96％，RSD=2.6％，n=5。
    3，7 样品测定
    按3．5的方法，测定三批样品。
    4 讨 论
    富马酸的鉴别及含量测定中，样品用浓HC1预先处理调pH值至2，一方面可使富马酸游离而被提取，另一方面无机酸不溶于有机溶剂丙酮，而不至于产生干扰。试验采用甲醇提取用丙酮100mL回流提取30min，残渣再加丙酮提取过滤后点样，用氯仿-乙酸乙酯-甲醇-乙酸(30：30：40：2)为展开剂展开，样品未见与对照相应位置上显示相同颜色的斑点，证明采用丙酮回流30min后富马酸被完全提取。