瓜蒌皮－总氨基酸的测定—紫外分光光度法

　

1 范围

本方法采用紫外分光光度法法测定瓜蒌皮中总氨基酸的含量。

本方法适用于葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes

rosthornii Harms 的干燥成熟果皮。

2 原理

瓜蒌皮经提取、显色用紫外分光光度计，于波长570nm 处测定吸收度，计算总氨基酸的含

量。

3 试剂（无特殊注明均为分析纯）

3.1 磷酸盐缓冲溶液：95mL/15mol/L 的磷酸氢二钠溶液+5mL/15mol/L 的磷酸二氢钾溶液

（pH=8.0）。

3.2 2%茚三酮∶水合茚三酮2.0g，加水50mL、0.080g 氯化亚锡搅拌溶解，于暗处静置过夜，过滤后，加水定容至100mL。甲醇

3.3 精氨酸对照品（北京化学试剂公司）

3.4 95％乙醇

3.5 氨水

4 仪器设备

4.1 紫外可见分光光度计

4.2 分析天平

5 试样制备

5.1 对照品溶液的制备

精密称取精氨酸对照品250.20mg 于50mL 量瓶中，加水制成每mL 含5.004mg 的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液（5.004mg/mL）1mL、2mL、3mL、4ml、5mL 于50mL量瓶中，加水稀释至刻度，作为系列标准溶液。

5.2 瓜蒌皮药材供试品的制备

精密称取瓜蒌皮4g，加水100mL，回流提取2 次（2h，1h），滤过，残渣用20mL 水分2次洗涤，洗涤液与滤液合并，浓缩至约2mL，加10mL95%乙醇，搅匀，冷藏12h，滤过，滤液

蒸干，加少量水使溶解，用10%的盐酸调节pH 值至3～4，过阳离子交换树脂柱（1.2cm×20cm），待液面流至树脂面时，用蒸馏水100ml 淋洗，再用2mol/L 氨水洗脱，流速0.5ml/min。收集200mL氨水洗脱液，水浴上蒸干，残渣加水使溶解并转移至50ml 量瓶中，稀释至刻度，作为瓜蒌皮药材供试品溶液。

6 操作步骤

6.1 标准曲线的建立

各精密吸取系列标准溶液1mL 于25mL 量瓶中，随行空白一份， 分别加入0.5ml 磷酸缓冲溶液，0.5mL2%茚三酮溶液，摇匀后置沸水浴中煮沸15min，取出以流水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，显色，在570nm 处测定吸收度。以对照品精氨酸量（mg）为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=2.8267X-0.1979。结果表明氨基酸在0.10008mg～0.50040mg 线性关系良好。

6.2 供试品的测定

精密吸取供试品溶液1mL 于50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，精密吸取1mL 于25mL 量瓶中，随行空白一份， 分别加入0.5mL 磷酸缓冲溶液，0.5mL2%茚三酮溶液，摇匀后置沸水浴中煮沸15min，取出以流水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，显色，在570nm 处测定。

 

注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一，“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

注2：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm 的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7 之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

7 结果计算：

7.1 供试品浓度计算

将供试品的吸收值带入对照品的线性回归方程y = a+ bx 进行计算：

Cx = (Ax –a ) / b

7.2 供试品百分含量计算

Wx = (TCxVx /W) × 100%

式中：y = a+ bx ― 为对照品的线性回归方程；

y ― 为AR；

x ― 为CR；

a ― 为截距；

b ― 斜率；

Ax ― 为供试品的吸收值；

AR ― 为对照品的吸收值；

CR ― 为对照品的浓度（mg/mL）；

Cx ― 为供试品的浓度（mg/mL）；

Vx ― 为供试品体积（L）；

T ― 为供试品稀释倍数；

W ―为供试品称样重量（g）；

Wx ―为供试品百分含量(%)。

8 精密度

精密吸取精氨酸对照品溶液（5.004mg/ml）2.5ml 于50mL 量瓶中，加水稀释至刻度。各精密吸取上述溶液1mL 于25ml 量瓶中，随行空白一份，分别加入0.5mL 磷酸缓冲溶液，0.5ml2%茚三酮溶液，摇匀后置沸水浴中煮沸15min，取出以流水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，显色，在570nm 处测定。总氨基酸含量平均值为11.668mg/mL，RSD=0.6%，n=6。

 

9 参考文献

洪燕龙，杜守颖，杨刚等．瓜蒌皮药材及其注射液中总氨基酸的含量测定方法研究．中国

实验方剂学杂志，2004，10（3）：10－12．

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