薄层色谱-紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红Ⅲ

摘 要：建立了食品中苏丹红Ⅲ号的新方法薄层色谱-紫外可见分光光度法。用薄层色谱分离杂质，优化了分析条件，讨论了影响测定的因素。方法的线性回归方程为A=0.09096c-0.00354，在0.50-15.0µg/mL 之间苏丹红Ⅲ号的浓度与吸光度成线性关系，相关系数为0.9992，检出限为0.05µg/mL。

关键词：苏丹红Ⅲ 薄层色谱 紫外可见分光光度法 分离
Determination of SudanⅢ in Foods
by Thin Layer Chromatography-UV-VIS Spectrophometry
Pang Yanling Wang Huaiyou

苏丹红Ⅲ号是一种人工合成的化工染料，化学名称为1-[4-（苯基偶氮）]偶氮-2-萘酚。苏丹红Ⅲ号为致癌物质[1，2]，被禁止作为食品添加剂使用。我国和欧盟标准检测方法为液相色谱法[3，4]，许多分析化学工作者对苏丹红染料的测定开展了研究，建立了一些有价值的测定方法，如HPLC法[5-7]、分子印迹固相萃取法[8]、毛细管液相色谱-质谱法[9]、电离质朴同位素稀释法[10]已应用于苏丹红染料的测定。但是上述方法由于仪器和试剂昂贵而难以普及。笔者研究了样品的处理方法，样品提取液用薄层展开后，用分光光度法测定，所用设备简单，分析结果与国家标准HPLC法准确度相当。

1 实验部分
1.2主要仪器与试剂
双光束紫外可见分光光度计：TU-1901型，北京普析通用仪器有限责任公司；
旋转浓缩器：R-250型，上海亚荣分析仪器厂；
高效液相色谱仪：Waters 2695型，美国Waters公司；
超声波萃取仪：FS-300型，上海超声有限公司；
硅胶板：HSG型，烟台化工研究所；
苏丹红Ⅲ号标准品：中国医药集团上海化学试剂公司；
苏丹红Ⅲ号标准溶液：100µg/mL。准确称取25mg苏丹红Ⅲ号标准品，用正己烷溶解并稀释至250 mL，混匀；
展开剂：正己烷-乙酸乙酯（100：0.66）；
正己烷、乙醚、甲酸、KOH、无水硫酸钠：均为分析纯，乙腈、丙酮：均为色谱纯，其它试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。
1.2操作步骤
（1）样品处理
胡椒粉、红辣椒粉：准确称取1.00-5.00g，置于250mL锥形瓶中，加入100mL正己烷，超声振荡20min，洗涤，定容。
粉状调味品：准确称取5.00-20.00g，置于250mL锥形瓶中，加入100mL正己烷，超声振荡20min，洗涤，定容。
酱油、辣椒酱：准确称取20.00g，置于250mL锥形瓶中，加入100mL正己烷，超声振荡20min，洗涤，定容。
辣椒油、香肠、肉类及油类产品：准确称取5.00g，置于250mL锥形瓶中，加入30mL乙醇溶液，振荡锥形瓶是样品分散后，加入10.0mLKOH水溶液（1+1），回流皂化30min。分别用50mL乙醚提取3次，合并乙醚溶液，用5%硫酸钠水溶液洗涤3将乙醚液旋转蒸发至近干，用正己烷定容到5mL。
（2）标准曲线的绘制
分别准确吸取苏丹红Ⅲ号标准溶液0.00、0.05、0.10、1.00、1.50、2.00、3.00 mL（相当于苏丹红Ⅲ号0.0、5、10、50、100、150、200、300 µg），用正己烷定容至10.0 mL，混匀。在波长223nm处用1cm石英比色皿，以空白溶液为参比，在紫外可见分光光度计上测定吸光度，以吸光度值A对浓度c作图。绘制工作曲线。
（3）样品分析
硅胶板先用展开剂蒸气饱和，再用微量进样器将试样溶液与苏丹红Ⅲ号标准溶液同时点于同一薄层板上。第一点取苏丹红Ⅲ3µ L点样，在苏丹红Ⅲ样品点一侧点样液50µ L（重复5个点）。放入展开缸中，上行展开，室温晾干，与标准比较进行定性。同时，刮取与标准品相同位置的样品斑点和相同面积的空白硅胶，分别置于50 mL烧杯中，加适量正己烷提取并定容至5.00mL。用紫外可见分光光度计测定吸光度。根据吸光度值、取样量、点样量进行含量计算。

2 结果与讨论
2.1苏丹红Ⅲ的吸收光谱
按照操作步骤，将苏丹红Ⅲ15µg/mL标准溶液在分光光度计上绘制吸收光谱，结果如图1所示。由图1可见，苏丹红Ⅲ的最大吸收波长位于223nm处，故实验选择223nm为检测波长。


2.2样品处理
采用超声萃取的方式提取样品，脂类含量高的样品皂化后再用乙醚提取。
2.3干扰因素
测定苏丹红色素时，食品种天然红色素的存在会严重干扰检测结果。
食品中存在的天然红色素主要是辣椒红色素。辣椒红色素的组分分子结构中所有发色团使其紫外-可见区有着独特的吸光区，因而其溶液或结晶在可见光下具有十分绚丽的红、橙或黄色。辣椒红色素最大吸收峰的波长λmax约为460-475nm[11]。在本实验中，采用薄层分离方法，是辣椒素与苏丹红Ⅲ分离，进而在苏丹红最大吸收波长（223nm）处进行定量测定，避免了天然色素的干扰。
2.4展开剂的选择
试验了几十种不同的展开剂，结果表明，展开剂正己烷-乙酸乙酯（V/V100：0.66）能使样品中的苏丹红Ⅲ与基体分离，故用正己烷-乙酸乙酯作为样品的展开剂。
2.5工作曲线
按1.2（2）的方法绘制标准曲线，求得苏丹红Ⅲ标准曲线的回归方程为A=0.09096c-0.00354，相关系数γ=0.9992。苏丹红Ⅲ在浓度为0.50-15.0µg/mL时遵守比尔定律。
2.6精密度与检出限
将5µg/mL的苏丹红Ⅲ号样品溶液按实验方法平行测定10次，测定结果列于表1。由表1可知，测定结果的相对标准偏差为2.46%，同时测定空白溶液，计算求得苏丹红Ⅲ的检出限为0.05µg/mL。
表1 精密度试验结果

2.7回收试验与样品分析
取同一空抱辣椒面样品7份，加入不同量的苏丹红Ⅲ标准品，按照操作步骤进行回收试验，试验结果列于表2。由表2可知，苏丹红Ⅲ的回收率为91.9%-94.1%。
表2 辣椒面中苏丹红Ⅲ的回收率试验（n=7）

2.8样品分析
按照测定条件测定辣椒粉样品，并与国家标准法[3]对照，结果见表3。由表3可见，两种方法测定结果相吻合，在置信度为95%时，用Cochran法对两组数据进行显著性检验[12]，表明两种方法之间不存在显著性差异。
表3 样品测定结果

3 结语
薄层分离-紫外吸收分光光度法测定苏丹红Ⅲ，结果准确，设备简单，灵敏度高，可用于食品中苏丹红Ⅲ号的测定。

参考文献：
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3 GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法
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荷泽学院化学与化工系 庞艳玲

山东师范大学化学化工与材料科学学院 王怀友