高效液相色谱法测定蔬菜中3种有机磷农药残留量

　有机磷农药是目前我国使用量较大的杀虫剂之一，主要应用于粮食、蔬菜和水果上。虽然有机磷农药属非持久性农药，但其大量使用必然会对环境产生负面影响，对人、蓄构成严重威胁．长期食用受污染的粮食、蔬菜，是导致癌症、动脉硬化、心血管病、胎儿畸形、死胎、早天、早衰等疾病的重要原因；绝大多数人食用有害蔬菜后并不马上表现出症状，但毒物在人体中富集，时间长了便会酿成严重后果。我国近年来发生的农药中毒事故大多数集中于高毒有机磷农药，以对硫磷最多，部分地区占80％左右。因此，建立有效的检测农副产品中有机磷农药残留量的方法具有重要意义。有机磷农药的测定常采用气相色谱法，可是，大部分有机磷农药具有很强的极性和热不稳定性，给气相色谱分析带来一定的难度。本研究采用高效液相色谱法同时测定蔬菜中甲基对硫磷、乙基对硫磷和甲拌磷。

　　1、实验部分

　　1．1仪器与试剂

　　仪器．LC-1OAT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，包括：SPD-10AVP／10APVP紫外-可见检测器，LC-1OA高压溶液输送泵和N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；BF2000氮气吹干仪(北京八方世纪科技有限公司)；FS-1电动匀浆机(金坛市富华仪器有限公司)．试剂．甲基对硫磷标准品(99.0％，国家农药质检中心(沈阳))；乙基对硫磷标准品(99.0％，天津农药质检中心)；甲拌磷标准品(98.0％，天津农药质检中心)；甲醇(色谱纯，北京化工厂)；乙腈(色谱纯，天津市博迪化工有限公司)；实验用水为重蒸馏水。

　　1．2色谱条件

　　色谱柱为Shim-Pack：VP-ODS(150L×4．6)；流动相为V甲醇：V水=85：15；流速为1.0mL／min．进样量20uL，以峰面积外标法定量。

　　1．3标准溶液的配制

　　准确称取一定量的农药标准品，用甲醇制成一定浓度的储备液，再逐级稀释储备液，得质量浓度分别为0.10、0.50、1.0、1.5、2.0mg／L的标准混合液。

　　1．4样品处理方法

　　取1000g的白菜，取可食部分，用干净的纱布擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎．准确称取3份25g试样，分别加入50.0mL的乙腈，在匀浆机中匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g氯化钠的100mL的具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡1min，静至10min，使乙腈与水相分层．将含乙腈的有机层经盛有3g的无水硫酸钠的漏斗过滤于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，从中吸取10mL溶液，再用氮气吹干仪吹至近干后用甲醇溶解定容至5mL，经0.45&mu；m滤膜过滤后进样。

　　2、结果与讨论

　　2．1测定波长的选择

　　分别将3种农药的标准储备液依次用UV一1100紫外／可见分光光度计进行波长扫描，测得3种农药的最大吸收波长分别为甲基对硫磷265nm，乙基对硫磷259nm，甲拌磷为238nm．综合考虑3种组分的最大吸收值及灵敏度，最终选择紫外检测波长为250nm。

　　2．2流动相组成对分离度的影响

　　实验考察了甲醇-水的不同比例对甲基对硫磷、乙基对硫磷、甲拌磷分离的影响。实验结果表明，随着甲醇含量的增加，其分离度逐渐减小，当甲醇：水=85：15时，各组分仍能够得到很好的分离，且分析所用的时间较短。

　　2．3工作曲线和检出限

　　取1．3节的标准溶液，在优化的色谱条件下进行分析，得到标准色谱图。同一样品平行测定5次，取其平均值，绘制工作曲线，以峰面积A对浓度c(mg／L)回归计算，结果表明线性关系良好，回归方程、相关系数和检测限。

　　2．4精密度实验

　　取质量浓度为1.5mg／L的混合标准品，在上述色谱条件下，连续进行7次测定，经计算得到测定甲基对硫磷、乙基对硫磷、甲拌磷的精密度RSD分别为4.6％、3.2％、2.9％。

　　2．5回收率测定

　　在已知含量的白菜样品中分别加入不同浓度的有机磷农药标准品，按&ldquo；1．4&rdquo；节方法制备样品液进行测定，扣除样品中原有的农药含量，求出加标回收率，结果可知，甲基对硫磷回收率为95.44％～98.33％；乙基对硫磷回收率为93.33％～101.67％；甲拌磷回收率为94.00％～97.78％。

　　2．6样品分析

　　在白菜中加入上述3种农药作为模拟蔬菜样品，按1．4节方法处理样品后按上述色谱条件进行测定。得到样品色谱图如图所示。甲基对硫磷、乙基对硫磷、甲拌磷的残留量分别为1.75、2.13、1.83mg/kg。