气相色谱法测定头孢匹胺中的残留溶剂
【摘要】目的建立测定头孢匹胺中的残留溶剂含量的方法。方法采用气相色谱法，用涂渍PEG?20M的填充柱,N2为载气，柱温100℃，以正丁醇为内标物，FID检测。结果丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺分别在进样量0.500～2.000μg、0.041～0.164μg和0.088～0.352μg范围内,与相应溶剂峰/内标峰的面积比值线性关系良好(r分别为0.9997、0.9994和0.9999),丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的平均回收率分别为101.0%、97.7%和100.4%，重复进样峰面积RSD分别为0.31%、1.28%和0.73%(n=5)。结论所建立的方法专属性好，简便准确，可用于检测头孢匹胺中的残留溶剂。
【关键词】气相色谱法头孢匹胺残留溶剂丙酮乙腈二甲基甲酰胺
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationoftheresidualsolventsincefpiramide.MethodsTheanalysiswasperformedonacolumncoatedbyPEG?20Munderthecolumntemperatureof100℃,withN2ascarriergas.ResultsThestandardcurvesofacetone,acetonitrileandN,N?dimethylformamidewerelinearwithintherangesof0.500～2.000μg,0.041～0.164μgand0.088～0.352μg(r=0.9997,0.9994and0.9999),respectively.Theaveragerecoveriesofacetone,acetonitrileandN,N?dimethylformamidewere101.1%,97.7%and100.4%,whiletheRSDforreplicationswere0.31%,1.28%and0.73%(n=5),respectively.ConclusionThemethodisspecific,simpleandaccurateforthequalitycontrolcefpiramiderawmaterials.
Keywords:GC;cefpiramide;residualsolvent;acetone;acetonitril;N,N?dimethylformamide
头孢匹胺(cefpiramide)是第三代头孢菌素类广谱抗生素，可进一步加工成钠盐或直接用于临床,对革兰氏阳性菌、阴性菌及厌氧菌均有强大的抗菌活力，对β?内酰胺酶稳定性好，有良好的临床价值［1］。由于各厂生产的头孢匹胺采用工艺和使用的溶剂不同，因而残留溶剂的种类也有所不同，需分别研究出适合的方法进行准确测定。本研究基于广州白云山化学制药厂生产的头孢匹胺产品，其生产过程中使用到国际协调组织(ICH)规定的二类溶剂乙腈和二甲基甲酰胺，以及三类溶剂丙酮,应在质量标准中加以监控。已有文献［2-3］报道类似品种头孢匹胺钠中残留溶剂的测定方法，但由于被测残留溶剂种类不同而不可直接引用。本文报道的气相色谱法，专属性强，能在同一次试验中同时测定3种溶剂的含量，无需程序升温，方法简便准确。
1仪器与试药
岛津GC?14A气相色谱仪；大连依利特公司产的涂渍PEG?20M的填充玻璃柱(3.2mm×2m)。丙酮和二甲基甲酰胺对照品(均为分析纯试剂，含量100.0%)，乙腈对照品(为色谱纯试剂，含量100.0%)，头孢匹胺原料由广州白云山化学制药厂提供，高纯度氮气由广州气体厂生产。
2方法与结果
2.1色谱条件与测定法
用涂渍PEG?20M的填充玻璃柱，以氮气为载气，流量10mL/min,进样口温度210℃，柱温100℃，氢火焰离子化检测器温度250℃。
称取正丁醇适量，加水制成50μg/mL的溶液，作为内标液。精密称取丙酮对照品约100mg、乙腈对照品约8mg和二甲基甲酰胺对照品约18mg置100mL量瓶中，加内标液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取头孢匹胺供试品约1g，置具塞试管中，准确加入内标液5mL，强力振摇5min，过滤，取续滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，用内标法以峰面积计算。
2.2色谱参数、检测限和定量限
头孢匹胺供试品溶液的色谱图见图1，丙酮、乙腈、正丁醇(内标)和二甲基甲酰胺峰柱效分别为850、800、600和1000，拖尾系数分别为1.4、1.2、1.3和1.3,丙酮与乙腈、乙腈与正丁醇及正丁醇与二甲基甲酰胺峰之间分离度分别为3.9、2.8和7.7。丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的检测限(信噪比3∶1)分别为1ng、0.5ng和0.5ng,定量限(信噪比10∶1)分别为2ng、1ng和2ng。
a.丙酮;b.乙腈;c.正丁醇;d.二甲基甲酰胺
图1头孢匹胺中的残留溶剂气相色谱图(略)
Fig.1GCChromatogramsoftheresidualsolventsintherawmaterials
2.3精密度试验
取对照品溶液重复进样5次，测得丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺峰面积与内标峰面积比的RSD分别为0.31%、1.28%和0.73%。同一份均匀样品，在不同仪器、不同操作者条件下测得3份结果，算出丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺含量结果重现性分别为1.5%、1.9%和1.7%。
2.4线性关系与范围
分别精密称取丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺对照品,按“2.1”项方法分别用内标溶液定量配制并稀释成质量浓度分别为丙酮500、750、1000、1500μg/mL，乙腈41、61.5、82、123、164μg/mL和二甲基甲酰胺88、132、176、264、352μg/mL的溶液，各准确进样1μL测定，结果进样量(m)与待测溶剂峰面积/内标峰面积比值(A)的线性回归方程分别为：丙酮A1=9.4826m1-0.2456(r=0.9997),乙腈A2=13.4495m2 0.03646(r=0.9994),二甲基甲酰胺A3=4.3421m3 0.0094(r=0.9999)；丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的进样量测定范围分别为0.500～2.000μg、0.041～0.164μg和0.088～0.352μg。
2.5回收率试验
按“2.1”项方法,分别用内标液配制对照品溶液,供试品溶液，以及丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的浓度均相当于对照品溶液的80%、100%和120%的供试品加对照品溶液各3份,依法进样测定,算出丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的加样回收结果如下：
丙酮：100.1%、104.6%、100.5%、101.4%、102.9%、99.3%、100.0%、99.3%和100.8%，平均101.0%(RSD1.75%)。
乙腈：97.1%、97.5%、96.1%、99.8%、96.6%、96.3%、99.0%、99.2%和97.9%，平均97.7%(RSD1.40%)。
二甲基甲酰胺:101.2%、99.3%、100.8%、102.8%、101.4%、99.6%、99.3%、98.6%和101.0%，平均100.4%(RSD1.32%)。
2.6样品测定
按“2.1”项方法分别测定头孢匹胺样品3批，测得其丙酮含量分别为：0.015%、0.013%和0.011%；乙腈含量分别为0.013%、0.011%和0.010%；二甲基甲酰胺含量分别为0.005%、0.002%、0.001%,均符合ICH建议的限度(0.5%、0.041%和0.088%)。
3讨论
3.13种溶剂均有很好的水溶性，头孢匹胺样品加水强力振摇后形成极细微颗粒的混悬液，能保证残留溶剂的溶出。
3.2二甲基甲酰胺为较高沸点的溶剂，其水溶液难以采用顶空进样法测定，且二甲基甲酰胺直接进样对毛细管柱伤害较大，因而选用填充柱直接进样法。
3.3本试验采用恒定柱温条件下测定有利于测定稳定性，采用内标法有利于减少进样操作的误差。
3.4以上试验表明，本气相色谱法专属性强，能在恒定柱温条件下同时测定3种残留溶剂的含量，方法快捷准确，可用于头孢匹胺残留溶剂的监控。
(来源：现代科学仪器网
【关键词】气相色谱法头孢匹胺残留溶剂丙酮乙腈二甲基甲酰胺
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationoftheresidualsolventsincefpiramide.MethodsTheanalysiswasperformedonacolumncoatedbyPEG?20Munderthecolumntemperatureof100℃,withN2ascarriergas.ResultsThestandardcurvesofacetone,acetonitrileandN,N?dimethylformamidewerelinearwithintherangesof0.500～2.000μg,0.041～0.164μgand0.088～0.352μg(r=0.9997,0.9994and0.9999),respectively.Theaveragerecoveriesofacetone,acetonitrileandN,N?dimethylformamidewere101.1%,97.7%and100.4%,whiletheRSDforreplicationswere0.31%,1.28%and0.73%(n=5),respectively.ConclusionThemethodisspecific,simpleandaccurateforthequalitycontrolcefpiramiderawmaterials.
Keywords:GC;cefpiramide;residualsolvent;acetone;acetonitril;N,N?dimethylformamide
头孢匹胺(cefpiramide)是第三代头孢菌素类广谱抗生素，可进一步加工成钠盐或直接用于临床,对革兰氏阳性菌、阴性菌及厌氧菌均有强大的抗菌活力，对β?内酰胺酶稳定性好，有良好的临床价值［1］。由于各厂生产的头孢匹胺采用工艺和使用的溶剂不同，因而残留溶剂的种类也有所不同，需分别研究出适合的方法进行准确测定。本研究基于广州白云山化学制药厂生产的头孢匹胺产品，其生产过程中使用到国际协调组织(ICH)规定的二类溶剂乙腈和二甲基甲酰胺，以及三类溶剂丙酮,应在质量标准中加以监控。已有文献［2-3］报道类似品种头孢匹胺钠中残留溶剂的测定方法，但由于被测残留溶剂种类不同而不可直接引用。本文报道的气相色谱法，专属性强，能在同一次试验中同时测定3种溶剂的含量，无需程序升温，方法简便准确。
1仪器与试药
岛津GC?14A气相色谱仪；大连依利特公司产的涂渍PEG?20M的填充玻璃柱(3.2mm×2m)。丙酮和二甲基甲酰胺对照品(均为分析纯试剂，含量100.0%)，乙腈对照品(为色谱纯试剂，含量100.0%)，头孢匹胺原料由广州白云山化学制药厂提供，高纯度氮气由广州气体厂生产。
2方法与结果
2.1色谱条件与测定法
用涂渍PEG?20M的填充玻璃柱，以氮气为载气，流量10mL/min,进样口温度210℃，柱温100℃，氢火焰离子化检测器温度250℃。
称取正丁醇适量，加水制成50μg/mL的溶液，作为内标液。精密称取丙酮对照品约100mg、乙腈对照品约8mg和二甲基甲酰胺对照品约18mg置100mL量瓶中，加内标液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取头孢匹胺供试品约1g，置具塞试管中，准确加入内标液5mL，强力振摇5min，过滤，取续滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，用内标法以峰面积计算。
2.2色谱参数、检测限和定量限
头孢匹胺供试品溶液的色谱图见图1，丙酮、乙腈、正丁醇(内标)和二甲基甲酰胺峰柱效分别为850、800、600和1000，拖尾系数分别为1.4、1.2、1.3和1.3,丙酮与乙腈、乙腈与正丁醇及正丁醇与二甲基甲酰胺峰之间分离度分别为3.9、2.8和7.7。丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的检测限(信噪比3∶1)分别为1ng、0.5ng和0.5ng,定量限(信噪比10∶1)分别为2ng、1ng和2ng。
a.丙酮;b.乙腈;c.正丁醇;d.二甲基甲酰胺
图1头孢匹胺中的残留溶剂气相色谱图(略)
Fig.1GCChromatogramsoftheresidualsolventsintherawmaterials
2.3精密度试验
取对照品溶液重复进样5次，测得丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺峰面积与内标峰面积比的RSD分别为0.31%、1.28%和0.73%。同一份均匀样品，在不同仪器、不同操作者条件下测得3份结果，算出丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺含量结果重现性分别为1.5%、1.9%和1.7%。
2.4线性关系与范围
分别精密称取丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺对照品,按“2.1”项方法分别用内标溶液定量配制并稀释成质量浓度分别为丙酮500、750、1000、1500μg/mL，乙腈41、61.5、82、123、164μg/mL和二甲基甲酰胺88、132、176、264、352μg/mL的溶液，各准确进样1μL测定，结果进样量(m)与待测溶剂峰面积/内标峰面积比值(A)的线性回归方程分别为：丙酮A1=9.4826m1-0.2456(r=0.9997),乙腈A2=13.4495m2 0.03646(r=0.9994),二甲基甲酰胺A3=4.3421m3 0.0094(r=0.9999)；丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的进样量测定范围分别为0.500～2.000μg、0.041～0.164μg和0.088～0.352μg。
2.5回收率试验
按“2.1”项方法,分别用内标液配制对照品溶液,供试品溶液，以及丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的浓度均相当于对照品溶液的80%、100%和120%的供试品加对照品溶液各3份,依法进样测定,算出丙酮、乙腈和二甲基甲酰胺的加样回收结果如下：
丙酮：100.1%、104.6%、100.5%、101.4%、102.9%、99.3%、100.0%、99.3%和100.8%，平均101.0%(RSD1.75%)。
乙腈：97.1%、97.5%、96.1%、99.8%、96.6%、96.3%、99.0%、99.2%和97.9%，平均97.7%(RSD1.40%)。
二甲基甲酰胺:101.2%、99.3%、100.8%、102.8%、101.4%、99.6%、99.3%、98.6%和101.0%，平均100.4%(RSD1.32%)。
2.6样品测定
按“2.1”项方法分别测定头孢匹胺样品3批，测得其丙酮含量分别为：0.015%、0.013%和0.011%；乙腈含量分别为0.013%、0.011%和0.010%；二甲基甲酰胺含量分别为0.005%、0.002%、0.001%,均符合ICH建议的限度(0.5%、0.041%和0.088%)。
3讨论
3.13种溶剂均有很好的水溶性，头孢匹胺样品加水强力振摇后形成极细微颗粒的混悬液，能保证残留溶剂的溶出。
3.2二甲基甲酰胺为较高沸点的溶剂，其水溶液难以采用顶空进样法测定，且二甲基甲酰胺直接进样对毛细管柱伤害较大，因而选用填充柱直接进样法。
3.3本试验采用恒定柱温条件下测定有利于测定稳定性，采用内标法有利于减少进样操作的误差。
3.4以上试验表明，本气相色谱法专属性强，能在恒定柱温条件下同时测定3种残留溶剂的含量，方法快捷准确，可用于头孢匹胺残留溶剂的监控。
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