高效液相色谱法测定血滞通胶囊中腺苷的含量
【摘要】目的应用高效液相色谱(HPLC)法测定血滞通胶囊中腺苷的含量。方法采用AgilentC18柱(4.6mm×250mm,5μmPN990967-902，SNUSNH008613，LNBO5096，madeinUSA)，以0.02%的冰醋酸溶液(用三乙胺调节pH值至6.5)-甲醇(92∶8)为流动相，检测波长为260nm，柱温28℃。结果腺苷的进样量在0.0105～0.3144μg范围内呈良好的线性关系，r=0.99999(n=7)。腺苷的平均回收率为100.1%，RSD为1.81%(n=6)。结论方法准确、简单、重复性好。
【关键词】血滞通胶囊；薤白；腺苷；高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveToestablishadeterminationmethodofthecontentofadenosineinXuezhitongCapsulebyHPLC.MethodsAgilentC18column(4.6mm×250mm,5μmPN990967-902,SNUSNH008613,LNBO5096,madeinUSA)wasused.Forthedeterminationofthecontentofadenosine,themobilephasewaspH6.5liquidofboth0.02%aceticacidglacialwithtriethylamineandmethanol(92∶8),andthedetectionwavelengthwas260nm,columntemperaturewas28℃.ResultsThecalibrationcurveofadenosinewaslinearovertherangeofwas0.0105～0.3144μg.Thecorrelationcoefficientwas0.99999(n=7).Theaveragerecoveryofadenosinewas100.1%,RSD=1.81%(n=6).ConclusionThemethodisaccurate,simpleandhighlyrepeatable.
Keywords：XuezhitongCapsule;AlliummacrostemonBunge;Adenosine;HPLC
血滞通胶囊为中药薤白的单方制剂，是由薤白经过加工制成的。薤白AlliummacrostemonBunge为百合科植物，葱属小根蒜的干燥鳞茎，主要野生于吉林、内蒙、辽宁等地，民间既作食用亦作药用。它具有理气宽胸、通阳散结之功效，中医临床广泛用于治疗胸痹，心痛彻背，脘痞不舒等症。薤白中含有大量的挥发油、腺苷、色氨酸及其衍生物和甾体皂苷等成分［1］。其中腺苷具有扩张冠状血管、增加冠状动脉血流量、扩张周围血管及减弱心肌收缩力的作用，同时还具有抗血小板凝集，降低全血黏度的作用，是薤白治疗胸痹等证的主要活性成分之一［2，3］。
1仪器与试药
LC-2010C高效液相色谱仪(岛津)，KQ-250B型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司生产，功率250W,频率40Hz)。腺苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110879-200202)，血滞通胶囊由吉林省东方制药有限公司提供。甲醇为色谱纯，冰醋酸、三乙胺等为分析纯，水为超纯水。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μmPN990967-902，SNUSNH008613，LNBO5096，madeinUSA)，流动相：0.02%的冰醋酸溶液(用三乙胺调节pH值至6.5)-甲醇(92∶8)为流动相,流速0.9ml/min；检测波长：260nm；柱温28℃；进样量20μl。见图1～3。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备取腺苷对照品适量，精密称定，加30%甲醇溶解并稀释制成每毫升中含腺苷8μg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2血滞通胶囊供试品溶液的制备取血滞通胶囊10粒内容物，研细，精密称取1.0g，置具塞的锥形瓶中，精密加入30%甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40Hz)30min，使腺苷溶解，取出，放冷，再称定重量，用30%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。
2.2.3薤白药材供试品溶液的制备取薤白药材适量，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加60%乙醇25ml，超声处理(功率250W，频率40Hz)40min，取出，放冷，以5000r/min离心20min，取上清液，置50ml量瓶中，残渣加60%乙醇25ml继续超声30min，取出，放冷，以5000r/min离心20min，取上清液，合并50ml量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取40ml，蒸干，残渣加30%甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，混匀。用0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。
2.3方法考察
2.3.1线性关系考察精密称取腺苷对照品10.48mg，置100ml量瓶中，加30%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0ml置10ml量瓶中，加30%甲醇稀释至刻度，摇匀。取1，5，10，15，20，25，30μl进样，记录色谱图，以腺苷的质量(μg)为横坐标，峰面积A为纵坐标，得回归方程为Y=3.54×106X-1.67×103，r=0.99999，线性范围为0.0105～0.3144μg(n=7)。
2.3.2精密度实验取腺苷供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，RSD=0.62%，表明精密度良好。
2.3.3稳定性实验取样品溶液，在室温下放置0，4，8，12h，分别进样，记录色谱图，结果腺苷RSD=0.33%，表明稳定性良好。
2.3.4重复性实验取同一批号样品，分别测定5次，腺苷含量的RSD=0.45%，表明重复性良好。
2.3.5回收率实验精密称取已知含量的血滞通胶囊样品约0.75g(含腺苷约0.0850mg)，精密加入腺苷对照品0.0786mg，按上述色谱条件测定，结果回收率为101.0%，RSD=1.81%(n=6)。
2.3.6样品测定取血滞通胶囊样品7批和药材2批，按上述供试品溶液制备方法及色谱条件。结果见表1。表1样品含量测定结果(略)
3讨论
3.1测定波长的选择取腺苷对照品溶液，在200～400nm扫描，结果在260nm的波长处有最大吸收，故选择260nm为测定波长。
3.2流动相的选择曾试用了甲醇-水、甲醇-0.01%的冰醋酸溶液、甲醇-0.05%的三乙胺溶液，经过比较，选择使用流动相效果最好。
3.3提取溶剂的选择腺苷为水溶性，曾试用过以水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、50%乙醇和60%乙醇，结果30%甲醇效果最好。但是药材黏度较大，曾比较了50%，60%，70%，90%乙醇，结果用60%乙醇效果较好。
3.4提取方法的选择曾对同一批号的血滞通胶囊样品和药材分别用超声方法和回流方法进行比较，所测得的腺苷含量无显著差别。所以选择超声方法提取，操作简单，快速方便。
3.5提取时间的选择曾比较了提取时间分别为20，30，40，50和60min，结果血滞通胶囊以提取30min为宜，药材以提取50min为宜。
本实验建立了高效液相色谱法测定薤白中腺苷的含量。方法简单、准确、重复性好，可作为薤白及其制剂的质量标准。
(来源：现代科学仪器|http://www.ms17.cn
【关键词】血滞通胶囊；薤白；腺苷；高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveToestablishadeterminationmethodofthecontentofadenosineinXuezhitongCapsulebyHPLC.MethodsAgilentC18column(4.6mm×250mm,5μmPN990967-902,SNUSNH008613,LNBO5096,madeinUSA)wasused.Forthedeterminationofthecontentofadenosine,themobilephasewaspH6.5liquidofboth0.02%aceticacidglacialwithtriethylamineandmethanol(92∶8),andthedetectionwavelengthwas260nm,columntemperaturewas28℃.ResultsThecalibrationcurveofadenosinewaslinearovertherangeofwas0.0105～0.3144μg.Thecorrelationcoefficientwas0.99999(n=7).Theaveragerecoveryofadenosinewas100.1%,RSD=1.81%(n=6).ConclusionThemethodisaccurate,simpleandhighlyrepeatable.
Keywords：XuezhitongCapsule;AlliummacrostemonBunge;Adenosine;HPLC
血滞通胶囊为中药薤白的单方制剂，是由薤白经过加工制成的。薤白AlliummacrostemonBunge为百合科植物，葱属小根蒜的干燥鳞茎，主要野生于吉林、内蒙、辽宁等地，民间既作食用亦作药用。它具有理气宽胸、通阳散结之功效，中医临床广泛用于治疗胸痹，心痛彻背，脘痞不舒等症。薤白中含有大量的挥发油、腺苷、色氨酸及其衍生物和甾体皂苷等成分［1］。其中腺苷具有扩张冠状血管、增加冠状动脉血流量、扩张周围血管及减弱心肌收缩力的作用，同时还具有抗血小板凝集，降低全血黏度的作用，是薤白治疗胸痹等证的主要活性成分之一［2，3］。
1仪器与试药
LC-2010C高效液相色谱仪(岛津)，KQ-250B型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司生产，功率250W,频率40Hz)。腺苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110879-200202)，血滞通胶囊由吉林省东方制药有限公司提供。甲醇为色谱纯，冰醋酸、三乙胺等为分析纯，水为超纯水。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μmPN990967-902，SNUSNH008613，LNBO5096，madeinUSA)，流动相：0.02%的冰醋酸溶液(用三乙胺调节pH值至6.5)-甲醇(92∶8)为流动相,流速0.9ml/min；检测波长：260nm；柱温28℃；进样量20μl。见图1～3。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备取腺苷对照品适量，精密称定，加30%甲醇溶解并稀释制成每毫升中含腺苷8μg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2血滞通胶囊供试品溶液的制备取血滞通胶囊10粒内容物，研细，精密称取1.0g，置具塞的锥形瓶中，精密加入30%甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40Hz)30min，使腺苷溶解，取出，放冷，再称定重量，用30%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。
2.2.3薤白药材供试品溶液的制备取薤白药材适量，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加60%乙醇25ml，超声处理(功率250W，频率40Hz)40min，取出，放冷，以5000r/min离心20min，取上清液，置50ml量瓶中，残渣加60%乙醇25ml继续超声30min，取出，放冷，以5000r/min离心20min，取上清液，合并50ml量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取40ml，蒸干，残渣加30%甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，混匀。用0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。
2.3方法考察
2.3.1线性关系考察精密称取腺苷对照品10.48mg，置100ml量瓶中，加30%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0ml置10ml量瓶中，加30%甲醇稀释至刻度，摇匀。取1，5，10，15，20，25，30μl进样，记录色谱图，以腺苷的质量(μg)为横坐标，峰面积A为纵坐标，得回归方程为Y=3.54×106X-1.67×103，r=0.99999，线性范围为0.0105～0.3144μg(n=7)。
2.3.2精密度实验取腺苷供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，RSD=0.62%，表明精密度良好。
2.3.3稳定性实验取样品溶液，在室温下放置0，4，8，12h，分别进样，记录色谱图，结果腺苷RSD=0.33%，表明稳定性良好。
2.3.4重复性实验取同一批号样品，分别测定5次，腺苷含量的RSD=0.45%，表明重复性良好。
2.3.5回收率实验精密称取已知含量的血滞通胶囊样品约0.75g(含腺苷约0.0850mg)，精密加入腺苷对照品0.0786mg，按上述色谱条件测定，结果回收率为101.0%，RSD=1.81%(n=6)。
2.3.6样品测定取血滞通胶囊样品7批和药材2批，按上述供试品溶液制备方法及色谱条件。结果见表1。表1样品含量测定结果(略)
3讨论
3.1测定波长的选择取腺苷对照品溶液，在200～400nm扫描，结果在260nm的波长处有最大吸收，故选择260nm为测定波长。
3.2流动相的选择曾试用了甲醇-水、甲醇-0.01%的冰醋酸溶液、甲醇-0.05%的三乙胺溶液，经过比较，选择使用流动相效果最好。
3.3提取溶剂的选择腺苷为水溶性，曾试用过以水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、50%乙醇和60%乙醇，结果30%甲醇效果最好。但是药材黏度较大，曾比较了50%，60%，70%，90%乙醇，结果用60%乙醇效果较好。
3.4提取方法的选择曾对同一批号的血滞通胶囊样品和药材分别用超声方法和回流方法进行比较，所测得的腺苷含量无显著差别。所以选择超声方法提取，操作简单，快速方便。
3.5提取时间的选择曾比较了提取时间分别为20，30，40，50和60min，结果血滞通胶囊以提取30min为宜，药材以提取50min为宜。
本实验建立了高效液相色谱法测定薤白中腺苷的含量。方法简单、准确、重复性好，可作为薤白及其制剂的质量标准。
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