高效液相色谱测定白芍中芍药苷的含量
【摘要】目的采用高效液相色谱(HPLC)法测定不同白芍药材中芍药苷含量，确定哪种白芍含芍药苷最高。方法采用色谱柱：HypersilC18柱(4.6mm×200mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸水(14：86)；检测：UV230nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃。结果2年生、10月份采收贮存期短的亳州白芍芍药苷含量最高。结论该方法简便准确可靠、重复性好。
【关键词】白芍芍药苷高效液相色谱质量
Abstract:ObjectiveTocomparethequalityofdifferentRadixRaeoniaeAlbawithHPLCmethods.MethodsTheseparationwascarriedoutonHypersilC18column(4.6mm×200mm，5μm)；themobilephasewasacetonitrile-H2O(acidifiedto0.05%withphosphoricacid)(14∶86)；theflow-ratewas1.0mml/min；thecolumntemperaturewas25℃.ResultsTherewasthehighestcontentofpaeoniflorininRadixPaeoniaeAlbaoftwo-year-growingtimeharvestedinOctoberwithshortstoragetime.ConclusionThemethodissimple,rapidwithgoodreproducibility.
Keywords:RadixPaeoniaeAlba；Paeontflorin；HPLC；Quality
白芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall的干燥根，其主要成分为芍药苷(Paeoniflorin)、芍药内脂苷(Albiflorin)、氧化芍药苷(Oxypaeoniflorin)、苯甲酰芍药苷(Benzoylpaeoniflorin)，通称芍药总苷(totalglucosidesofpaeony，TGP)。具有抗炎、抗病毒、解痉镇痛、护肝等多种药理活性。白芍药材及各种制剂均以芍药苷含量为质量控制标准。
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、MVD检测器、Agilent1100色谱工作站)、电子分析天平AE240(十万分之一，瑞士，METTLER-TOLEDOCo.)、CQ250超声波清洗器(上海超声波仪器厂)、UV-3300(日本日立公司)。
1.2试药
芍药苷对照品(编号：0900-200102，含量测定用，中国药品生物制品检定所购)，白芍药材经江西中医学院药用植物学科组鉴定符合2000年版《中国药典》白芍项下标准。乙腈为色谱纯(MerkCo.)，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1对照品溶液制备
精密称取白芍对照品适量，加50%乙醇制成每毫升含60mg的溶液，摇匀，即得。
2.2供试品溶液的制备
精密称取本品干燥的粉末0.5g，置50ml容量瓶中，精密加入50%乙醇35ml，超声提取30min，冷却，加50%乙醇至刻度，摇匀，滤过，再过0.45μm滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2.3色谱条件
色谱柱：HypersilC18柱(4.6mm×200mm，5μm)(大连Elite公司)；流动相：乙腈-0.05%磷酸水(14∶86)；检测：UV230nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃。理论塔板数以芍药苷峰计算不得低于2000。在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液各进样10μl进行HPLC测定，结果见图1～2。由图中可见供试品中芍药苷与芍药苷对照品峰保留时间一致，并且与样品中其它组分达到了很好的分离。
2.4线性关系
考察精密称取芍药苷对照品0.02480g，置50ml容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，即得到2.48mg/ml的芍药苷对照品溶液，从中分别精密吸取0.25，0.5，2.5，5.0，10.0和15.0ml的对照品溶液，分别置6个25ml的容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各10μl，绘制标准曲线，得回归方程Y=1809.3984X 2.2135，r=0.99999。
2.5提取方法的确定
本实验对提取溶剂、提取溶剂的浓度、提取时间、提取方法等进行综合考察，最后确定供试品溶液的制备方法为：用50%乙醇超声提取30min即可。
2.6精密度实验
精密吸取同一份供试品溶液10μl，重复进样6次，测定芍药苷峰面积积分值，RSD为0.80%。
2.7重现性实验
按“供试品溶液的制备”方法，对同一批样品分别制备6份供试品溶液，各吸取10μl进样测定，测得芍药苷含量RSD为0.72%。
2.8稳定性实验
取同一份供试品溶液在上述色谱条件下，分别在0，6，12，24，36，72h各进样10μl，测定芍药苷峰面积积分值RSD为0.64%。
2.9回收率实验
采用加样回收测定法。分别精密称取已知含量(芍药苷1.778%)的样品约0.25g，共6份，分别加入一定量的对照品(浓度为0.88mg/ml，精密加入5ml)，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行HPLC测定，测得芍药苷的平均回收率为99.92%，RSD为1.36%；结果见表1。结果表明，本法回收率高。表1回收率实验结果(略)
2.10样品含量测定
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样测定，结果见表2。表213批样品的芍药苷含量测定结果(略)
3讨论
3.1不同产地芍药苷含量差异从芍药苷含量测定结果看，不同产地的白芍芍药苷含量各不相同。其主要成分芍药苷含量以亳州产白芍最高；本实验所用亳州白芍为带皮的根，与文献［1］报道的未去皮白芍药材中芍药苷含量最高相符。
3.2不同采收期芍药苷量差异从芍药苷含量测定结果看，以四川白芍为例，采收期8月份，9月份，10月份芍药苷含量不同，采收期在10月份芍药苷含量最高，与文献［2］报道的采收期在10月份芍药苷含量最高相符。
3.3贮存期对芍药苷含量的影响从白芍饮片1(贮存1年)、白芍饮片3(贮存2年)、白芍饮片4(贮存3年)芍药苷含量测定结果看，随贮存期的延长，白芍中芍药苷的含量呈下降趋势，所以白芍的贮存期不宜太长。
3.4不同生长年限对芍药苷含量的影响不同生长期亳州白芍中芍药苷的含量不同，以2年生者含量最高，随着生长期的延长，芍药苷的含量呈下降趋势。据有关文献报道可能因为生长期长，淀粉含量增加，芍药苷在体内转化分解。这提示合理利用亳州白芍资源，可缩短生长期，增加芍药苷含量，即经济又有效。
总之，根据上述测定结果，可见本法操作简单，重现性好，可作为白芍质量控制的有效方法。
(来源：现代科学仪器|http://www.ms17.cn
【关键词】白芍芍药苷高效液相色谱质量
Abstract:ObjectiveTocomparethequalityofdifferentRadixRaeoniaeAlbawithHPLCmethods.MethodsTheseparationwascarriedoutonHypersilC18column(4.6mm×200mm，5μm)；themobilephasewasacetonitrile-H2O(acidifiedto0.05%withphosphoricacid)(14∶86)；theflow-ratewas1.0mml/min；thecolumntemperaturewas25℃.ResultsTherewasthehighestcontentofpaeoniflorininRadixPaeoniaeAlbaoftwo-year-growingtimeharvestedinOctoberwithshortstoragetime.ConclusionThemethodissimple,rapidwithgoodreproducibility.
Keywords:RadixPaeoniaeAlba；Paeontflorin；HPLC；Quality
白芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall的干燥根，其主要成分为芍药苷(Paeoniflorin)、芍药内脂苷(Albiflorin)、氧化芍药苷(Oxypaeoniflorin)、苯甲酰芍药苷(Benzoylpaeoniflorin)，通称芍药总苷(totalglucosidesofpaeony，TGP)。具有抗炎、抗病毒、解痉镇痛、护肝等多种药理活性。白芍药材及各种制剂均以芍药苷含量为质量控制标准。
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、MVD检测器、Agilent1100色谱工作站)、电子分析天平AE240(十万分之一，瑞士，METTLER-TOLEDOCo.)、CQ250超声波清洗器(上海超声波仪器厂)、UV-3300(日本日立公司)。
1.2试药
芍药苷对照品(编号：0900-200102，含量测定用，中国药品生物制品检定所购)，白芍药材经江西中医学院药用植物学科组鉴定符合2000年版《中国药典》白芍项下标准。乙腈为色谱纯(MerkCo.)，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1对照品溶液制备
精密称取白芍对照品适量，加50%乙醇制成每毫升含60mg的溶液，摇匀，即得。
2.2供试品溶液的制备
精密称取本品干燥的粉末0.5g，置50ml容量瓶中，精密加入50%乙醇35ml，超声提取30min，冷却，加50%乙醇至刻度，摇匀，滤过，再过0.45μm滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2.3色谱条件
色谱柱：HypersilC18柱(4.6mm×200mm，5μm)(大连Elite公司)；流动相：乙腈-0.05%磷酸水(14∶86)；检测：UV230nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃。理论塔板数以芍药苷峰计算不得低于2000。在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液各进样10μl进行HPLC测定，结果见图1～2。由图中可见供试品中芍药苷与芍药苷对照品峰保留时间一致，并且与样品中其它组分达到了很好的分离。
2.4线性关系
考察精密称取芍药苷对照品0.02480g，置50ml容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，即得到2.48mg/ml的芍药苷对照品溶液，从中分别精密吸取0.25，0.5，2.5，5.0，10.0和15.0ml的对照品溶液，分别置6个25ml的容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各10μl，绘制标准曲线，得回归方程Y=1809.3984X 2.2135，r=0.99999。
2.5提取方法的确定
本实验对提取溶剂、提取溶剂的浓度、提取时间、提取方法等进行综合考察，最后确定供试品溶液的制备方法为：用50%乙醇超声提取30min即可。
2.6精密度实验
精密吸取同一份供试品溶液10μl，重复进样6次，测定芍药苷峰面积积分值，RSD为0.80%。
2.7重现性实验
按“供试品溶液的制备”方法，对同一批样品分别制备6份供试品溶液，各吸取10μl进样测定，测得芍药苷含量RSD为0.72%。
2.8稳定性实验
取同一份供试品溶液在上述色谱条件下，分别在0，6，12，24，36，72h各进样10μl，测定芍药苷峰面积积分值RSD为0.64%。
2.9回收率实验
采用加样回收测定法。分别精密称取已知含量(芍药苷1.778%)的样品约0.25g，共6份，分别加入一定量的对照品(浓度为0.88mg/ml，精密加入5ml)，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行HPLC测定，测得芍药苷的平均回收率为99.92%，RSD为1.36%；结果见表1。结果表明，本法回收率高。表1回收率实验结果(略)
2.10样品含量测定
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl进样测定，结果见表2。表213批样品的芍药苷含量测定结果(略)
3讨论
3.1不同产地芍药苷含量差异从芍药苷含量测定结果看，不同产地的白芍芍药苷含量各不相同。其主要成分芍药苷含量以亳州产白芍最高；本实验所用亳州白芍为带皮的根，与文献［1］报道的未去皮白芍药材中芍药苷含量最高相符。
3.2不同采收期芍药苷量差异从芍药苷含量测定结果看，以四川白芍为例，采收期8月份，9月份，10月份芍药苷含量不同，采收期在10月份芍药苷含量最高，与文献［2］报道的采收期在10月份芍药苷含量最高相符。
3.3贮存期对芍药苷含量的影响从白芍饮片1(贮存1年)、白芍饮片3(贮存2年)、白芍饮片4(贮存3年)芍药苷含量测定结果看，随贮存期的延长，白芍中芍药苷的含量呈下降趋势，所以白芍的贮存期不宜太长。
3.4不同生长年限对芍药苷含量的影响不同生长期亳州白芍中芍药苷的含量不同，以2年生者含量最高，随着生长期的延长，芍药苷的含量呈下降趋势。据有关文献报道可能因为生长期长，淀粉含量增加，芍药苷在体内转化分解。这提示合理利用亳州白芍资源，可缩短生长期，增加芍药苷含量，即经济又有效。
总之，根据上述测定结果，可见本法操作简单，重现性好，可作为白芍质量控制的有效方法。
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