高效液相色谱法测定岗松中槲皮素的含量

　　　【摘要】目的对岗松进行分析研究，测定岗松中槲皮素含量,为岗松的质量标准制定提供方法和依据。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定岗松中槲皮素含量。色谱柱为LichrospherC18(4.6mm×250mm,5μm)，流动相为甲醇-水-磷酸-三乙胺(50:50:0.45:0.2)，检测波长370nm，柱温室温，流速1ml/min。结果槲皮素在0.08～0.48μg范围内呈良好线性关系(r=0.9994)，平均回收率为100.64％，RSD为1.65％(n=9)。结论该法简便可行，重复性好，可作为岗松中槲皮素的含量测定方法。

　　【关键词】岗松；槲皮素；高效液相色谱

　　Abstract：ObjectiveTodevelopamethodfordeterminingthecontentofquercetininthenaturalherbofBaeckeafrutescensL..MethodsAnHPLCmethodwassetuptodeterminethecontentofquercetininBaeckeafrutescensL.,usinglichrospherC18(4.6mm×250mm,5μm)column，andmethanol-water-phosphoricacid-triethylamine(50:50:0.45:0.2)asthemobilephase,theUVdetectionwavelengthwas370nm,withaflowrateof1.0ml/minatroomtemperature.ResultsAgoodlinearwasobtainedintherangeof0.08～0.48μgandtheaveragerecoverywas100.64%,RSDwas1.65%(n=9).ConclusionThemethodissimple,andwithgoodreproducibilityforthedeterminationofquercetininBaeckeafrutescensL.

　　Keywords：BaeckeafrutescensL.;Quercetin;HPLC

　　岗松为桃金娘科岗松属植物岗松BaeckeafrutescensL.，主要分布于广西、广东、江西、福建等地，具有化淤止痛、清热解毒、利尿通淋、杀虫止痒之功效，用于跌打淤肿、肝硬化、热泻、热淋、小便不利、阴痒、脚气、皮肤瘙痒、疥癣、水火烫伤、虫蛇咬伤。目前对岗松生药的研究除了其挥发油成分外［1］，还从岗松中提取分离得到了黄酮类化合物槲皮素。关于岗松中黄酮类化合物的含量测定未见文献报道。本研究采用高效液相色谱法，对其中的黄酮类化合物槲皮素进行含量测定，以期为药材的进一步开发利用提供基础化学数据，为岗松药材的质量标准研究奠定基础。

　　1仪器与试药

　　美国Waters公司液相色谱仪，515泵，UV2487可变波长检测器；威玛龙色谱工作站。

　　槲皮素对照品(供含量测定用，批号0081-9904)由中国药品生物制品检定所提供，经面积归一化法测定，纯度大于98%；岗松植物采自广西南宁，经广西中医药研究院中药研究室赖茂祥副研究员鉴定为桃金娘科岗松属植物岗松B.frutescensL.。甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸、三乙胺及其它试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1色谱条件色谱柱为LichrospherC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇-水-磷酸-三乙胺(50∶50∶0.45∶0.2)；检测波长370nm；柱温室温；进样量20μl；理论塔板数按槲皮素计算大于3500。

　　2.2提取条件的选择对回流时间进行了比较，结果加热回流1h的提取率显著高于0.5h，而与回流2h的提取率相当(见图1)，表明回流1h基本可以将样品中的槲皮素提取完全，为缩短分析时间，选择回流时间为1h。

　　图1不同提取时间提取率的比较(略)

　　2.3对照品溶液及供试品溶液的制备

　　2.3.1对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成12.5μg/ml的对照品溶液，色谱图见图2。

　　图2槲皮素对照品色谱图(略)

　　2.3.2供试品溶液的制备取岗松药材粉末0.3g，精密称定，置烧瓶中，精密加入50%甲醇-盐酸(95:5)混合溶液25ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45mm)滤过，取续滤液，即得。色谱图见图3。

　　2.4线性关系的考察精密称取槲皮素对照品约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得1mg/ml标准品溶液，精密吸取2.5ml标准品溶液至50ml量瓶中，用流动相稀释并定容至刻度，得50μg/ml的溶液，摇匀，备用。分别精密吸取50μg/ml的对照品溶液0.8ml，1.6ml，2.4ml，3.2ml，4.0ml，4.8ml至10ml量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，进行测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=8.2491×106X-2.9605×104，r=0.9994。结果表明，对照品在0.08～0.48μg范围呈良好线性关系。

　　图3供试品色谱图(略)

　　2.5精密度实验取同一供试品溶液，连续重复进样6次，结果槲皮素峰面积平均值为1944301，RSD=1.69%。

　　2.6稳定性实验取同一供试品，每隔2h进样，进行了12h考察，结果槲皮素含量的RSD＝1.83%。

　　2.7重复性实验精密称取同一批次岗松药材样品各6份，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算，结果槲皮素的平均含量为1.0639mg/g，RSD＝2.30%。

　　2.8加样回收率试验称取已测知含量的药材样品(槲皮素平均含量为1.0639mg/g)0.15g，共9份，精密称定。按高、中、低3个浓度分别精密加入1.0mg/ml的槲皮素对照品溶液0.10，0.16，0.22ml，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算，结果槲皮素的加样平均回收率为100.64%,RSD=1.65%。

　　2.9样品含量测定收集不同产地的岗松药材，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件依法测定槲皮素含量。结果见表1。

　　表1岗松样品中槲皮素含量测定结果(略)

　　3结论

　　本实验建立了分析岗松药材中槲皮素含量的HPLC法，以前对岗松药材的研究多局限于其中的挥发油成分，通过本次研究，完善了岗松药材的质量标准，为药材的进一步开发利用提供了更多的化学数据。