高效液相色谱法测定泌淋胶囊中没食子酸的含量
【摘要】[目的]建立高效液相色谱法测定泌淋胶囊中没食子酸含量的方法。[方法]采用高效液相色谱法，Agilent1200高效液相色谱仪，色谱柱为ZORBAXSB?C18柱(4.6×250mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(6∶94);流速：1.0ml/min;检测波长270nm。[结果]泌淋胶囊的平均回收率为99.10%，RSD为1.07%。[结论]本法简便、快捷、稳定、准确，可作为泌淋胶囊中没食子酸的含量测定方法。
【关键词】泌淋胶囊;没食子酸;高效液相色谱法
Abstract：[Objective]TodevelopanHPLCmethodfordeterminingGallicacidinMilinCapsules.[Method]ThecontentsofGallicacidweredeterminedbyHPLC.Agilent1200HPLC.ChromatographycolumnwasZORBAXSB?C18(4.6×250mm,5μm);mobilephase：methanol?0.2%phosphoric(6∶94);flowratewas1.0ml/min;UVdetectionwavelengthwas270nm.[Results]TheaveragerecoveryofGallicacidwas99.10%,RSDwas1.07%.[Conclusion]Thismethodwassimple,quick,stable,accurate,canbeusedasamethodfordeterminingGallicacidinMilinCapsules.
Keywords：MilinCapsules;Gallicacid;HPLC
泌淋胶囊是以贵州苗药头花蓼PolygonumcapitatumBuch?Ham.ExD.Don为主要原料，配伍酢酱草、车前草、石椒草经提取精制而成的中药制剂，具有清热解毒，利尿通淋，临床用于湿热蕴结所致淋症，小便不利，淋漓涩痛，尿路感染见上述诸证侯者。国家药品标准(试行)中，泌淋胶囊仅有四季红(头花蓼)和石椒草对照药材薄层鉴别以及甲醇浸出物，而无主要有效成分含量测定指标，专属性不强，难于有效控制泌淋胶囊制剂质量;由于头花蓼为方中主药，主要有效成分为没食子酸[1]，目前没食子酸的分析方法主要是高效液相色谱法[2?5]和薄层扫描法[6];为了提高药品质量确保疗效;本试验采用高效液相色谱法测定泌淋胶囊中没食子酸含量作为该制剂的定量标准，本法操作简便、快捷，且稳定性和准确性良好。
1仪器与试剂
Agilent1200高效液相色谱仪(四元泵，自动进样器，DAD检测器，AgilentLC化学工作站)。
没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110831?200302)，泌淋胶囊(贵州百祥制药有限责任公司，批号20060303，20060401，20060501)，缺四季红的阴性对照品(原料药材由贵州百祥制药有限责任公司提供，按处方自制);甲醇为色谱纯，水为高纯水。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为ZORBAXSB?C18柱(4.6×250mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(6：94);流速：1.0mL/min;检测波长270nm，柱温：室温。进样量：10μl。
2.2对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的没食子酸对照品13.96mg，置10ml量瓶中，加50%甲醇溶解并加至刻度，摇匀，作为贮备液备用。精密吸取对照品贮备液2ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度,摇匀，作对照品溶液(55.84μg/ml)。
2.3供试品溶液的制备取供试品20粒，精密称定，求得平均装量后，混匀，研细，精密称取适量(约0.3g)，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理40min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，过滤，取滤液再经0.45μm微孔滤膜过滤后，即得。
2.4测定法对照品溶液与供试品溶液分别进样10μl，测定，以外标法计算每粒胶囊中没食子酸的含量，即得。
2.5阴性对照试验精密称定按处方比例自制的缺四季红阴性对照样品约0.3g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。按上法测定，结果在阴性对照色谱图中，在没食子酸峰处无色谱峰出现，表明阴性对照品无干扰，如图1。ABC
1.没食子酸
图1对照品(A)、供试品(B)、阴性对照样品(C)的HPLC图2.6线性范围考察精密吸取对照品液(55.84μg/mL)，按上述色谱条件分别进样1、2、4、8、16、20μl。以没食子酸对照品的进样量(μg)为自变量(x),相应峰面积为固变量(y)，求得回归方程为y=2896.4x?5.7602，r=0.9999(n=7)。结果表明：当没食子酸进样量在0.0558～1.1168μg范围内时，进样量与峰面积显良好的线性关系。
2.7精密度实验取同一份对照品溶液(55.84μg/ml),按上述色谱条件，连续测定6次，测得6次峰面积的RSD=0.10%(n=6)。
2.8重复性实验取同一批样品(批号20060303)按上述方法平行测定5份计算。结果测得没食子酸含量的RSD=1.21%(n=5)。
2.9稳定性实验取同一份对照品溶液(55.84μg/ml),每隔一定时间按上述色谱条件测定一次，并计算其没食子酸含量。共考察12h，测定6次。结果6次结果的RSD=0.75%(n=6)。
2.10加样回收率实验精密称取已知含量的样品(批号20060303)约0.1g，平行6份，分别置50ml量瓶中，每两份为一组，分别精密加入没食子酸对照品贮备液(1.396mg/ml)2.0ml、1.0ml、0.5ml。按“2.3”项下方法制成供试品溶液。按上述色谱条件依法测定。结果平均回收率99.10%，RSD=1.07%，回收率良好。结果见表1。表1加样回收率试验结果
2.11样品测定取泌淋胶囊样品3批，分别按2.3项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下色谱条件和2.4项下测定法测定没食子酸含量，结果见表2。表2样品中没食子酸含量
3讨论
3.1泌淋胶囊是由头花蓼、酢酱草、车前草、石椒草配伍制成，成分较复杂，根据没食子酸的理化性质，即没食子酸可溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等溶剂，为使没食子酸提取完全，并尽量减少其他杂质的提出，我们曾采用水、50%甲醇、70%乙醇、丙酮等不同溶剂进行超声及回流提取比较，结果表明50%甲醇超声提取40min效果最佳，时间超过40min提取并不能增加。
3.2高效液相色谱法测定没食子酸含量的方法使用的流动相主要还有甲醇?水(77∶23)、乙腈?0.4%磷酸(5∶95)、水?乙酸(98∶2)、2%甲醇乙腈溶液?0.1%磷酸等，我们通过试验比较最终采用甲醇?0.2%磷酸溶液(6∶94)作为流动相，没食子酸与其他组分色谱峰分离良好，出峰时间适宜。
(来源：现代科学仪器|http://www.ms17.cn
【关键词】泌淋胶囊;没食子酸;高效液相色谱法
Abstract：[Objective]TodevelopanHPLCmethodfordeterminingGallicacidinMilinCapsules.[Method]ThecontentsofGallicacidweredeterminedbyHPLC.Agilent1200HPLC.ChromatographycolumnwasZORBAXSB?C18(4.6×250mm,5μm);mobilephase：methanol?0.2%phosphoric(6∶94);flowratewas1.0ml/min;UVdetectionwavelengthwas270nm.[Results]TheaveragerecoveryofGallicacidwas99.10%,RSDwas1.07%.[Conclusion]Thismethodwassimple,quick,stable,accurate,canbeusedasamethodfordeterminingGallicacidinMilinCapsules.
Keywords：MilinCapsules;Gallicacid;HPLC
泌淋胶囊是以贵州苗药头花蓼PolygonumcapitatumBuch?Ham.ExD.Don为主要原料，配伍酢酱草、车前草、石椒草经提取精制而成的中药制剂，具有清热解毒，利尿通淋，临床用于湿热蕴结所致淋症，小便不利，淋漓涩痛，尿路感染见上述诸证侯者。国家药品标准(试行)中，泌淋胶囊仅有四季红(头花蓼)和石椒草对照药材薄层鉴别以及甲醇浸出物，而无主要有效成分含量测定指标，专属性不强，难于有效控制泌淋胶囊制剂质量;由于头花蓼为方中主药，主要有效成分为没食子酸[1]，目前没食子酸的分析方法主要是高效液相色谱法[2?5]和薄层扫描法[6];为了提高药品质量确保疗效;本试验采用高效液相色谱法测定泌淋胶囊中没食子酸含量作为该制剂的定量标准，本法操作简便、快捷，且稳定性和准确性良好。
1仪器与试剂
Agilent1200高效液相色谱仪(四元泵，自动进样器，DAD检测器，AgilentLC化学工作站)。
没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110831?200302)，泌淋胶囊(贵州百祥制药有限责任公司，批号20060303，20060401，20060501)，缺四季红的阴性对照品(原料药材由贵州百祥制药有限责任公司提供，按处方自制);甲醇为色谱纯，水为高纯水。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为ZORBAXSB?C18柱(4.6×250mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(6：94);流速：1.0mL/min;检测波长270nm，柱温：室温。进样量：10μl。
2.2对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的没食子酸对照品13.96mg，置10ml量瓶中，加50%甲醇溶解并加至刻度，摇匀，作为贮备液备用。精密吸取对照品贮备液2ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度,摇匀，作对照品溶液(55.84μg/ml)。
2.3供试品溶液的制备取供试品20粒，精密称定，求得平均装量后，混匀，研细，精密称取适量(约0.3g)，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理40min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，过滤，取滤液再经0.45μm微孔滤膜过滤后，即得。
2.4测定法对照品溶液与供试品溶液分别进样10μl，测定，以外标法计算每粒胶囊中没食子酸的含量，即得。
2.5阴性对照试验精密称定按处方比例自制的缺四季红阴性对照样品约0.3g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。按上法测定，结果在阴性对照色谱图中，在没食子酸峰处无色谱峰出现，表明阴性对照品无干扰，如图1。ABC
1.没食子酸
图1对照品(A)、供试品(B)、阴性对照样品(C)的HPLC图2.6线性范围考察精密吸取对照品液(55.84μg/mL)，按上述色谱条件分别进样1、2、4、8、16、20μl。以没食子酸对照品的进样量(μg)为自变量(x),相应峰面积为固变量(y)，求得回归方程为y=2896.4x?5.7602，r=0.9999(n=7)。结果表明：当没食子酸进样量在0.0558～1.1168μg范围内时，进样量与峰面积显良好的线性关系。
2.7精密度实验取同一份对照品溶液(55.84μg/ml),按上述色谱条件，连续测定6次，测得6次峰面积的RSD=0.10%(n=6)。
2.8重复性实验取同一批样品(批号20060303)按上述方法平行测定5份计算。结果测得没食子酸含量的RSD=1.21%(n=5)。
2.9稳定性实验取同一份对照品溶液(55.84μg/ml),每隔一定时间按上述色谱条件测定一次，并计算其没食子酸含量。共考察12h，测定6次。结果6次结果的RSD=0.75%(n=6)。
2.10加样回收率实验精密称取已知含量的样品(批号20060303)约0.1g，平行6份，分别置50ml量瓶中，每两份为一组，分别精密加入没食子酸对照品贮备液(1.396mg/ml)2.0ml、1.0ml、0.5ml。按“2.3”项下方法制成供试品溶液。按上述色谱条件依法测定。结果平均回收率99.10%，RSD=1.07%，回收率良好。结果见表1。表1加样回收率试验结果
2.11样品测定取泌淋胶囊样品3批，分别按2.3项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下色谱条件和2.4项下测定法测定没食子酸含量，结果见表2。表2样品中没食子酸含量
3讨论
3.1泌淋胶囊是由头花蓼、酢酱草、车前草、石椒草配伍制成，成分较复杂，根据没食子酸的理化性质，即没食子酸可溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等溶剂，为使没食子酸提取完全，并尽量减少其他杂质的提出，我们曾采用水、50%甲醇、70%乙醇、丙酮等不同溶剂进行超声及回流提取比较，结果表明50%甲醇超声提取40min效果最佳，时间超过40min提取并不能增加。
3.2高效液相色谱法测定没食子酸含量的方法使用的流动相主要还有甲醇?水(77∶23)、乙腈?0.4%磷酸(5∶95)、水?乙酸(98∶2)、2%甲醇乙腈溶液?0.1%磷酸等，我们通过试验比较最终采用甲醇?0.2%磷酸溶液(6∶94)作为流动相，没食子酸与其他组分色谱峰分离良好，出峰时间适宜。
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