分光光度法测定6种忍冬藤中绿原酸的含量

　　忍冬藤Caulis Lonicerae为常用中药，具有清热解毒,疏风通络的功效。2005年版《中国药典》规定忍冬藤为忍冬科Caprifoliaceae植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥茎枝[1]。但在实际使用中，多种金银花原植物的藤茎(即茎枝)在不同的区域以中药忍冬藤入药。《中华本草》记载忍冬藤的来源有忍冬科植物忍冬L. japonica Thunb.、山银花L. confusa DC.、红腺忍冬L. hypoglauca Miq.、黄褐毛忍冬L. fulvotomentosa Hsu et S. G.Cheng等的茎枝[2]。据作者调研，川渝忍冬藤品种也很复杂。本实验对川渝主要的6种金银花原植物的藤茎用分光光度法进行了有效成分绿原酸的含量测定，以期对川渝产忍冬藤的质量控制和开发提供参考。

　　1 仪器、试剂和样品

　　Lambda35分光光度计(Perkin Elmer)，TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)，Sartrorius BP211D 1/10万电子分析天平，ZK-82B型电热真空干燥箱。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，80℃减压干燥至恒重)，蒸馏水，分析纯甲醇。

　　实验材料为成都中医药大学药学院万德光教授通过原植物分类学鉴定的6种干燥忍冬藤茎。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品5.87 mg，置于100 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成58.70 μg/ml的绿原酸溶液。

　　2.2 测定波长的选择将对照品溶液和供试品溶液在200～400 nm进行扫描，其均在327 nm波长处有最大吸收，故检测波长选择为327 nm。

　　2.3 标准曲线的绘制及线性范围精密吸取绿原酸对照品溶液1，4，8，12，15，20 ml，分别置于50 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成1.174，4.696，9.392，14.088，17.610，23.480 μg/ml的绿原酸溶液，以甲醇作空白对照，在327 nm波长处测吸收度。以吸收度(A)对进样浓度(M)进行回归，得绿原酸线性回归方程为A=0.039 76M-0.002 7，r=0.999 9 ，线性范围为1.174～23.480 μg/ml。

　　2.4 供试品溶液的制备精密称取药材细粉约0.5 g，加甲醇定容于25 ml容量瓶中，超声30 min,放置至室温，滴加甲醇至25 ml，摇匀，精密吸取1 ml上清液用甲醇定溶于25 ml容量瓶中，稀释倍数为1 250，作为药材供试品溶液。

　　2.5 精密度实验将1号样品制成的供试品溶液，按标准曲线项下操作重复测定6次，RSD为0.31%(n=6)，说明精密度良好。

　　2.6 重现性实验 精密称取6份同一样品(1号)，各约0.5 g，按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作测定，RSD为1.08%(n=6)，说明重现性好。

　　2.7 稳定性实验对1号供试品溶液在0，1，2，3，4，5 h按标准曲线项下操作各测定1次，RSD=0.74%(n=6)，说明样品溶液在5 h内基本稳定。

　　2.8 回收率实验采用加样回收法。精密称定6份1号样品各约0.25 g，分别精密加入绿原酸对照品0.25，0.50，1.00 mg(3水平共6份)，按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作。结果见表1。

　　表1 回收率实验结果(略)

　　2.9 样品测定按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作测定，从回归方程求得绿原酸的质量，再计算出忍冬藤中绿原酸的含量。结果见表2。

　　3 小结与讨论

　　3.1 供试品溶液和对照品绿原酸溶液的紫外扫描图谱在250 nm～400 nm范围内一致，证明本实验所用测定方法确实可行。为了保证测试结果的可比性，材料来源全为植株从上往下数第5～15节之间的藤茎，未采集木栓层已脱落的老藤。所测结果绿原酸含量在0.43%～2.22%之间，相差5倍，主要集中在0.66%～1.22%之间。

　　表2 忍冬藤中绿原酸含量(略)

　　3.2 2005年版《中国药典》首次规定了用HPLC法测定忍冬藤中绿原酸的含量，并且要求其含量不少于0.1%。本实验结果远高于《中国药典》中的限量要求,这是由于金银花中有绿原酸的几种异构体[3]，其原植物忍冬藤中也应该含绿原酸的几种异构体，分光光度法可测定其总含量[4]，所以本实验所得结果实为绿原酸类的总含量。