高效液相色谱法测定大豆中喹禾糠酯农药的残留量

喹禾糠酯(quizalofop-P-tefury1)是美国有利来路公司新开发的除草剂，化学名称为(-2-[4-(6-氯喹喔啉-2-基氧基)苯氧基]丙酸-四氢呋喃-2-甲酯)，主要用于大豆、花生、油菜、棉花、亚麻等作物防除一年生和多年生禾本科杂草。它是一种苗后选择性除草剂，通过杂草叶面吸收并传导至整个植株体，抑制杂草正常酯类的合成，阻止其发芽和根茎生长而使杂草死亡。目前，对喹禾糠酯在大豆中的残留分析国内外均未见报道，我们借鉴和参考其他芳氧苯氧丙酸酯类农药分析，建立了4％喹禾糠酯乳油在大豆中残留量的高效液相色谱分析方法(HPLC)，其精密度和回收率均较好，完全能满足日常检验工作的需要。 
1 实验部分 
1．1 仪器与试剂 
P230高效液相色谱仪，带有紫外检测器和色谱工作站。 
甲醇为色谱纯，三氯甲烷、氯化钙、乙酸乙酯、石油醚、无水硫酸钠、硅胶、活性炭均为分析纯。 
喹禾糠酯标准品(质量分数为99.6％)和4％喹禾糠酯乳油均由美国有利来路公司提供。 
1．2 高效液相色谱条件 
Zorbax XDB-Cl8色谱柱(250 mm x 4.6mm i．d．，5μm，Agilent)；流动相：甲醇-水(体积比为80：20)，流速0.7mL／min；检测波长：240nm ；进样量：5μL；柱温：35℃ 。在上述条件下喹禾糠酯的保留时间为10.5min。 
1．3 样品前处理 
(1)样品提取：取粉碎并过20目筛的大豆样品20g(精确至0.1 g)于250mL具塞锥形瓶中，加入甲醇-水(体积比为80：20)混合溶液50mL，超声提取10min。在铺有助滤剂的布氏漏斗中减压抽滤。用甲醇-水(体积比为80：20)混合溶液20mL冲洗锥形瓶及滤渣，合并滤液，移人分液漏斗，加入5％氯化钙溶液80mL，用三氯甲烷萃取3次(50 mL，40mL，40mL)。萃取液过无水硫酸钠脱水，置于旋转蒸发器中于4O℃ 下减压浓缩至近干，移人填充柱内净化。 
(2)样品净化：用干装法装柱。在玻璃柱(20cm x 1.5cm i．d．)内依次加入1g助滤剂、2g硅胶、0.5g活性炭及少许无水硫酸钠。先用20mL乙酸乙酯-石油醚(体积比为95：5)混合淋洗液预淋玻璃柱，弃去淋洗液，尔后用3×1mL混合淋洗液溶解浓缩物并转移到柱中，然后用70mL乙酸乙酯-石油醚(体积比为95：5)混合溶液淋洗，弃去前5mL淋洗液，收集以后流出的淋洗液，在4O℃下减压浓缩至近干，用氮气流吹干后准确加入甲醇定容至lmL，供HPLC测定。 
2 结果与讨论 
2．1 提取方法的选择 
分别对大豆的提取方式与条件进行试验，比较了振荡提取和超声波提取的效果。结果表明，振荡提取40min和超声波提取10min的效果是一致的。为了节约时间，确定采用超声波提取10min。 
2．2 检测波长的确定 
根据紫外光谱扫描可知，在205nm处吸收最大，在240nm附近有较强吸收。考虑在205nm处检测时干扰大，故选用240nm作为检测波长，此时其他物质干扰较小，方法有较高的灵敏度。 
2．3 柱净化所用淋洗液的确定 
以乙酸乙酯-三氯甲烷作淋洗液时，在标准品出峰位置有较明显的杂质干扰。改变淋洗液为乙酸乙酯-石油醚(体积比为95：5)时，回收率高，没有杂质干扰，能满足对残留分析的要求。 
2．4 柱温的选择 
考察了柱温(25～55℃)对保留时间和峰面积的影响。结果发现，温度增加时，保留时间变化幅度不大，温度变化对峰面积影响不明显。考虑到色谱柱使用的温度条件，选择柱温为35℃ 。 
2．5 线性关系与检出限 
准确称取喹禾糠酯标准品10.0mg，用流动相定容，配制成100.0mg／L的标准母液，再用此标准母液稀释成0.025，0.05，0.1，0.2，0.5mg／L系列标准溶液，按照上述色谱条件测定。峰面积y对相应质量浓度x(mg/L)的直线回归方程为Y=34853X 一139.89，相关系数r=0.999 8，最低检出限(以S/N=3计)为0.01mg／kg。 
2．6 方法的回收率和精密度 
在大豆空白样品中按0.01，0.1，1.0mg／kg 3个剂量分别添加喹禾糠酯标准品，重复3次，按照上述前处理方法和色谱条件测定方法的回收率。结果表明，在此添加水平下测定喹禾糠酯回收率，其相对标准偏差为0.58％～2.51％，说明本方法是准确可靠的。