高效液相色谱法测定丁氯麻滴眼液中氯霉素的含量

摘要：目的建立高效液相色谱法测定丁氯麻滴眼液中氯霉素含量。方法 固定相为Kromasil C18柱(4.6mm×25cm，5μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(50：50：0.5：0.5)，流速1mL/min，检测波长为278nm，柱温为3O℃ 。结果进样量在0.1304～O.6520μg时，与峰面积呈良好线性，r=0.9999(n=5)，平均回收率为98.74％，RSD为0.35％(n=5)。结论方法准确、重现性好、操作简便。可用于丁氯麻滴眼液的质量控制。
    关键词：丁氯麻滴眼液；氯霉素；高效液相色谱法
    丁氯麻滴眼液处方由氯霉素、盐酸丁卡因、盐酸麻黄碱组成，具有消炎、止痛作用，对治疗电光性眼炎疗效突出。氯霉素是该制剂中的主要抗炎成分，原标准中仅采用滴定法测定样品中的总氯量(不包括氯霉素分子中的氯原子)以及盐酸丁卡因的含量，未提供氯霉素的含量测定方法，不能有效地控制丁氯麻滴眼液的质量。
    中国药典2000版中，氯霉素及含氯霉素制剂中氯霉素的含量测定，采用紫外分光光度法或微生物法。微生物法操作复杂，条件不易控制，监测周期长，不适于小批量的医院制剂生产模式。紫外分光光度法中，氯霉素样品与标准品的紫外吸收曲线有较大的差异，最大吸收波长可能偏离，氯霉素降解产生的杂质也能影响其含量测定结果。本实验采用高效液相法测定丁氯麻滴眼液中氯霉素含量，准确性高，重现性好，操作简便。
    1 仪器与试药
    HEWLETTPACKARDl1O0型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，G1322A On-Line Vacuum Degasser。Quat Pump，G1313A ALS，G1316A Colcomp，G1315A ，DAD，Aglilent Chemstation。
    氯霉素对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为0780—200004)；水为去离子重蒸水；其余试剂均为分析纯；丁氯麻滴眼液(本院制剂室自制，含氯霉素0.25 g／lO0 mL，批号为0401 19、040220、040303)。
    2 方法与结果
    2．1 色谱条件
    流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(50：50：0.5：0.5)；色谱柱：Kromasil(4.6mm×25cm，5μm)；流速：1.0mL/min；检测波长：278nm；柱温：30℃。
    2．2 对照品溶液以及样品溶液的配制
    2．2．1 对照品溶液的配制 精密称取氯霉素对照品16.3mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释刻度，摇匀，精密吸取上述溶液0.5mL置1OmL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(浓度为0.0326mg/mL )。
    2．2．2 供试品溶液的配制精密量取丁氯麻滴眼液0.1mL置1OmL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
    2．2．3 氯霉素阴性液的配制按处方比例，按丁氯麻滴眼液的生产工艺配制成不含氯霉素的阴性样品，精密量取缺氯霉素样品0.1mL置1OmL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，作为氯霉素阴性液。
    2．3 系统适应性试验
    在“2．1”色谱条件下，氯霉素对照品、氯霉素阴性液、丁氯麻滴眼液供试品溶液色谱图见图1。氯霉素的理论塔板数为12085 与最近的杂质峰分离度为21.31。氯霉素阴性液在与氯霉素对照品相同保留时间无杂质峰出现，对测定无干扰。
    2．4 线性范围
分别配制6.52、13.04、19.56、26.08、32.60μg/mL氯霉素对照品溶液，以自动进样器取2OμL进样，计算峰面积。以进样量一峰面积进行线性回归，结果进样量在0.130 4～O.6520μg线性关系良好，经统计得回归方程为y=0.3081+2249X，r=0.9999。
    2．5 进样精密度
    取供试品溶液，连续进样6次，分别测定峰面积，计算RSD值，结果RSD为0.12％，表明方法精密度良好。
    2．6 稳定性试验
    取供试品液，避光、冷藏放置0、1、2、4、8 h后，各取20μL进样，HPLC法测定峰面积，计算RSD值，结果表明8h内氯霉素含量无明显变化，RSD为0.10( n=5)，表明样品稳定性好。
    2．7 方法精密度试验
    取同一批样品，按“2．2．2”项下方法制备5份供试品溶液，取20μL进样，HPLC法测定，记录峰面积，计算样品中的氯霉素含量，结果RSD为1.07。表明本方法重现性好。
    2．8 加样回收率试验
    取已知含量样品(批号为040220)5份，每份0.04 mL，分别加入氯霉素对照品溶液(O．032 6 rng·mL )0.5 mL，按“2．2．2”项下方法制备5份供试品溶液，取2OμL进样，记录峰面积，计算样品中的氯霉素含量，计算回收率，结果平均回收率为98.74%，RSD为0.35%。
    2．9 样品测定
    精密吸取丁氯麻滴眼液样品0.1mL置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液，以自动进样器取20μL进样，测定峰面积，计算样品浓度。
    3 讨论
    采用高效液相色谱法测定制剂中氯霉素的含量，文献已有报道，但丁氯麻滴眼液中氯霉素含量的高效液相法测定，尚未见报道。有人采用甲醇-水(1：1)为流动相测定复方氯霉素滴眼液取得较好分离效果，简单易得，但是在本试验中效果不甚理想；另有文献报道采用0.01mol/L NaH2P04-甲醇-乙腈(300：160：40，加三乙胺0.5 mL，用磷酸调pH至3.0)能较好地分离氯霉素，但考虑到流动相中酸、盐在固定相中的残留难以彻底清除，影响色谱柱的寿命及分离效果，而且价格昂贵，因此自拟了甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(50：50：0.5：0.5)为流动相，分离效果令人满意，且配制简单，经济易得。
    本试验表明，HPLC法测定丁氯麻滴眼液中氯霉素含量，准确性高、重现性好、操作简便，可以用于丁氯麻滴眼液的质量控制。