紫外分光光度法测定石蒜鳞茎的总生物碱含量

　　　【摘要】目的建立一种简单快速的方法来测定石蒜鳞茎总生物碱含量,为石蒜鳞茎质量控制提供依据。方法紫外分光光度法,以加兰他敏为对照品,测定波长为289nm。结果加兰他敏在20.4～102.0μg/ml范围内与吸光度值呈良好的线性关系,计算得回归方程Y=0.0084X-0.0227,r=0.9999(n=5)；加样回收率为99.8%,RSD=1.44%;测定结果在5h内稳定，RSD=0.64%；不同来源石蒜鳞茎的总生物碱含量差异较大，栽培石蒜鳞茎的总生物碱含量可以达到并超过野生石蒜。结论该测定方法稳定、快速、简便,测定结果良好。

　　【关键词】石蒜；总生物碱；紫外分光光度法

　　DeterminationofTotalAlkaloidsinBulbofLycorisradiatebyUV-spectrophotography

　　Abstract：ObjectiveAneffectivemethodwasestablishedinordertodeterminethetotalalkaloidsfrombulbofL.radiate.MethodsThetotalalkaloidswereextractedfromthesamplesandtestedat289nm.ResultsThecalibrationcurveofgalanthaminewerelinear(r=0.9999),andtherecoveryratewasperfect(99.8%).Theresultsofmeasurementwereconsistentin5hours.Thecontentsoftotalalkaloidsweredifferentwhenthebulbswerefromdifferentpopulations.ConclusionThismethodissimple,effectiveandquickandthecontentsoftotalalkaloidsweredifferentamongdifferentpopulations.

　　Keywords：Lycorisradiata;Totalalkaloids;UV-spectrophotography

　　石蒜(Lycorisradiata)为石蒜科(Amaryllidaceae)石蒜属多年生草本植物，主要分布于长江流域及西南各省。据《本草纲目》等记载，石蒜具有解毒、祛痰、利尿、催吐等功效，主治痈疮恶核、咽喉肿痈、水肿等。石蒜的鳞茎含有石蒜碱(Lycorin)、加兰他敏(Galanthamine)、水仙碱(Tazettine)、石蒜来宁(Lycorenine)、普洛维因(Pluviine)、石蒜胺(Lycoramine)、维他廷(Vitatine)、亥派斯特林(Hippeastrine)等十多种生物碱和重要医药成分。石蒜碱是治疗阿米巴痢疾药吐根代用品的原料，也有一定抗癌作用；加兰他敏、石蒜胺(力可拉敏)在临床上为治疗小儿麻痹后遗症恢复神经功能的要药。1995年版《中国药典》记载，加兰他敏的氢溴酸盐为原料药和注射液已成功用于小儿麻痹后遗症、重症肌无力、肠麻痹的治疗以及手术后的催醒剂。近年来，国内外将其用于轻中度阿尔茨海默症(AD)的治疗。加兰他敏作为第2代胆碱酯酶抑制剂，因其药效持续时间长，不良反应小，服药方便，而日益受到各国研究人员及临床医师的青睐［1～5］。

　　目前,国内外对石蒜的研究主要集中在石蒜生物碱的成分分析，引种栽培和临床药效的研究［6～9］。何丽一等［10，11］曾利用分光光度法分别对石蒜碱、氢溴酸加兰他敏进行了测定，而对石蒜鳞茎总生物碱含量的测定方法研究未见报道,石蒜鳞茎总生物碱含量的测定对于研究石蒜生物碱代谢，控制石蒜质量，合理栽培、采收，提高提取率具有重要意义。本文主要目的在于建立一套稳定、快速、简便，测定结果良好的石蒜鳞茎总生物碱含量测定方法,为石蒜鳞茎品质分析提供参考。同时我们利用该方法对不同栽培方式及野生石蒜鳞茎的总生物碱含量进行了测定比较。

　　1器材

　　UV-2501PC型分光光度计(日本岛津公司);电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);加兰他敏对照品(中国药品生物制品检定所)；所用试剂均为国产分析纯。

　　取盛花期开花植株的鳞茎,切成片后于55～60℃干燥12h，粉碎后过80目筛备用。石蒜鳞茎来源于4个不同样地。分别来自于南京汤山、南京紫金山的两个野生居群及江苏省中科院植物研究所2个不同栽培样点。

　　2方法与结果

　　2.1样品供试液的制备称取石蒜鳞茎粉末(过80目筛)12.000g,置于平底烧瓶中,加12ml10%NaOH溶液，静置15min,加50ml醋酸乙酯(P>0.900),摇匀后放在80℃水浴中，保持回流。第1次回流2h,第2次回流1h，第3次回流1h。将滤液合并，减压浓缩至干，用甲醇定容至25ml，将此溶液过滤后，用移液枪精密吸取50μl入10ml容量瓶，用甲醇定容至10ml备用。

　　2.2波长扫描以甲醇为空白对照,将标准对照品溶液、样品供试液和空白对照液在200～700波长范围内进行扫描。结果显示前两者在(289±2)nm处有最大吸收值,且吸收峰相同，而空白对照液在289nm处几乎没有吸收,故本实验选择289nm为测定波长。见图1。

　　2.3稳定性实验室温下取40.8μg/ml的对照品溶液,分别在1,2,3,4,5h后,于289nm处测定吸光度。结果5h内稳定，RSD=0.64%。

　　2.4标准曲线精密称取加兰他敏对照品0.0255g，置于25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得到1020μg/ml对照品溶液。精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml入10ml容量瓶，补甲醇至刻度。以甲醇为空白于289nm下测定吸光度值。以取样量为横坐标,吸光度值为纵坐标,计算得回归方程Y=0.0084X-0.0227,r=0.9999(n=5),加兰他敏在20.4～102μg/ml浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。结果见图2。

　　2.5精密度实验取5份标准对照液0.5ml,照2.4测定方法制备标准品供试液和空白对照液,在289nm波长处测定吸光度值,RSD为0.51%,表明精密度较好。

　　1.样品2.对照3.甲醇

　　图1波长扫描图(略)

　　图2加兰他敏标准曲线(略)

　　2.6加样回收率实验用100μl移液枪取已知总生物碱含量的石蒜鳞茎样品液一式5份各50μl,置于10ml容量瓶中,分别加入浓度为1020μg/ml的对照品溶液0.3ml。在每个容量瓶中分别补甲醇至刻度，摇匀后依法测定,计算其回收率，平均加样回收率为99.8%，RSD=1.44%。

　　2.7样品总生物碱的测定取不同来源样品,按2.1的方法制备样品供试液和空白对照液,在289nm波长处分别测定吸光度并计算总生物碱相对含量。从表1可以看出,不同来源石蒜鳞茎的总生物碱含量不同。中山植物园梅林栽培居群石蒜鳞茎总生物碱的含量最高；南京紫金山野生居群总生物碱含量最低。

　　表1不同居群石蒜鳞茎的总生物碱含量(略)

　　3讨论

　　紫外分光光度法是根据生物碱分子结构的不同，在紫外区某一波长处有最大吸收，其吸收度与生物碱的含量成正比的原理进行定量测定的。该法已成功运用于多种中草药总生物碱含量的测定［12～14］。

　　石蒜生物碱大多溶于水、乙醇、醋酸乙酯、氯仿等。用水提取药粉易糊化；用酸性水溶液提取法提取，在后面的萃取过程中易造成加兰他敏及其他水溶性石蒜生物碱的流失。因此，本研究采用亲脂性有机溶剂提取法，提取液回收溶剂后即得总生物碱，尽量减少了生物碱的流失。

　　从总生物碱的测定结果来看，不同的生长环境对石蒜鳞茎的总生物碱含量有较大的影响。野生居群石蒜鳞茎总生物碱含量差异较大，这可能是由于环境条件的差异导致植物能量及物质代谢的变化，进而影响生物碱代谢的变化；人工栽培居群石蒜鳞茎的总生物碱含量可以达到并超过野生居群。该结果可为石蒜鳞茎的品质分析及进一步研究合理的栽培条件提供一定的参考依据。