跌打止痛巴布剂中桂皮醛等成分含量的气相色谱法测定

　　　【摘要】目的建立气相色谱方法同时测定跌打止痛巴布剂中樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚5种成分的含量。方法用挥发油提取法提取样品中挥发油成分制备成供试品溶液，以石英毛细管柱(phenomenexZB-WAX，长30m，内径0.32mm，涂层0.5μm)为色谱柱，氮气作载气，FID检测器，采用程序升温，内标法测定样品中5种成分含量。结果樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚在同一色谱条件下得到良好分离，线性关系良好，平均加样回收率(n=6)分别为98.32%，97.43%，95.89%，96.26%，98.78%。结论该方法简便、准确，可用于跌打止痛巴布剂的质量控制。

　　【关键词】樟脑;薄荷脑;水杨酸甲酯;桂皮醛;丁香酚;毛细管气相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentsoffivemaincomponents(camphor,menthol,methylsalicylate,cinnamicaldehydeandeugenol)inDieDaZhiTongCataplasmbyGC.MethodsThesamplesolutionwasdistilledinvolatileoildeterminationapparatus.Aquartzcapillarycolumn(phenomenexZB-WAX,length30m,innerdiameter0.32mm,coating0.5μm)wasusedasthechromatographiccolumnwithnitrogenasthecarriergas.Aflameionizationdetector(FID)wasprepared;thecolumntemperaturewasincreasedduringtheanalysisandtheinternalstandardmethodwasappliedtodeterminethecontentsofthe5componentsinthesamplesolution.ResultsCamphor,menthol,methylsalicylate,cinnamicaldehydeandeugenolwerewellseparatedunderthesamechromatographiccondition,showingagoodlinearrelationship.Theaveragerecoveryofthefivecomponents(n=6)were98.32%,97.43%,95.89%,96.26%and98.78%,respectively.ConclusionTheexperimentalmethodissimple,accurate,andcanbeusedforthequalitycontrolofDieDaZhiTongCataplasm.

　　Keywords：Camphor;Menthol;Methylsalicylate;Cinnamicaldehyde;Eugenol;GC

　　跌打止痛巴布剂是由苏木、桃红、红花等77味中药经超临界二氧化碳萃取后，加入桂皮油、丁香罗勒油等9味挥发油制成的水凝胶型膏贴剂，具有活血化瘀、消肿止血、行气止痛、收敛生肌的功效，对治疗跌打损伤、火伤烫伤、刀伤出血具有显著疗效[1]。该巴布剂属中药材提取物与亲水性基质混匀后涂布于裱背材料上制成的新型膏贴制剂，挥发油部分主要含有水杨酸甲酯、桂皮油、丁香罗勒油等，其中桂皮油主要成分为桂皮醛，丁香罗勒油主要成分为丁香酚。本文针对其剂型特点，采用毛细管气相色谱法同时测定5种主要成分的含量[2，3]。

　　1仪器和试药

　　美国Agilent6890N气相色谱仪及配套工作站，石英毛细管柱(phenomenex公司);樟脑对照品(批号747-200606)、薄荷脑对照品(批号0728-00005)、水杨酸甲酯对照品(批号110707-200107)、桂皮醛对照品(批号110710-200714)、丁香酚对照品(批号725-200209)，以上对照品均购自中国药品生物制品检定所，萘(纯度>99%，sigma);跌打止痛巴布剂(由广州敬修堂药厂提供，批号：081109，081116，081117，081118，081119，081120，规格：10cm×6cm);氮气、氢气和空气均为高纯气体，其他试剂为分析纯，水为纯净水。

　　2方法与结果

　　2.1混合对照品溶液的制备分别精密称取樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚对照品适量，加无水乙醇配成每毫升含1mg的溶液，摇匀，即得。

　　2.2内标溶液的制备精密称取萘适量，加无水乙醇配成每毫升含10mg的溶液，摇匀，即得。

　　2.3供试品溶液的制备取跌打止痛巴布剂5片(含药膏30g)，剪成1cm宽小条，去除盖衬，置于1000ml圆底烧瓶中，加水500ml，连接挥发油提取器，自提取器上端加水使充满刻度，并溢流入烧瓶为止。连接回流冷凝管，加热回流5h，放冷，分取油层，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，精密称定重量。从中精密称取挥发油100μg，加入内标溶液250μl，无水乙醇稀释至10ml，摇匀，即得。

　　2.4阴性对照溶液制备取缺桉油、樟脑、薄荷油、冰片、水杨酸甲酯、八角茴香油、桂皮油、丁香罗勒油的阴性样品，按供试品溶液相同方法处理制成溶液。

　　2.5色谱条件色谱柱：ZB-WAX毛细管柱(30m×0.32mm，0.5μm)，固定液为聚乙二醇(PolyethyleneGlycol);载气：N2，柱流量：1.0ml·min-1;进样口温度为210℃，进样量为1μl，分流进样，分流比40∶1;检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，温度为245℃;柱温采用程序升温，80℃保持2min后开始升温，以5℃/min升温至140℃，保持8min，再以12℃/min升温至220℃，保持2min。

　　2.6系统适应性精密量取混合对照品溶液及萘内标液适量，加无水乙醇稀释至10ml，吸取1μl进样测定，5个峰的保留时间均在30min以内，且各指标峰分离度均大于1.5，理论塔板数均不小于6000，符合药典含量测定要求。色谱图见图1~4。图1供试品溶液色谱图图2混合对照品溶液色谱图图3内标溶液色谱图图4阴性对照溶液色谱图

　　2.7方法学考察

　　2.7.1线性关系考察精密吸取混合对照品溶液0.5,1.5,2.5,3.5,5.0ml，分别精密加入内标溶液250μl，用无水乙醇定容至10ml，摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过后，进样1μl测定峰面积。以各指标峰峰面积与内标峰面积之比为纵坐标(Y)，各对照品浓度与内标物浓度之比为横坐标(X)进行线性回归，得樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的回归方程分别为：Y=0.63207X 0.15990，r=0.99968.Y=0.56908X 0.04303，r=0.99936.Y=0.88323X 0.05737，r=0.99951.Y=0.61575X 0.03480，r=0.99945.Y=0.57945X 0.04344，r=0.99985.线性范围分别为56.0～560μg·ml-1，60.5～605μg·ml-1，57.0～570.0μg·ml-1，58.5～585.0μg·ml-1，59.5～595.0μg·ml-1。

　　2.7.2精密度实验精密吸取同一供试品溶液，连续进样测定5次，结果樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚与内标物的平均峰面积比值RSD分别为0.63%，0.76%，1.17%，0.85%，0.95%。

　　2.7.3重复性实验取跌打止痛巴布剂(批号：081109)7份，每份5片，按“2.3”项下方法制成供试品溶液，依法测定。结果樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚与内标物的平均峰面积比值RSD分别为1.80%，1.16%，2.19%，1.09%，1.45%。

　　2.7.4稳定性实验室温避光条件下，取同一供试品溶液分别在0，2，4，6，8，24h进样1μl测定峰面积，结果樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚与内标物的平均峰面积比值RSD分别为1.61%，0.93%，1.10%，1.97%，1.67%。

　　2.7.5加样回收率取已知含量跌打止痛巴布剂成品(批号：081109)6份，每份3片，剪成1cm宽小条，去除盖衬，置于1000ml圆底烧瓶中。精密加入樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚对照品溶液，按“2.3”项下方法制备成供试品溶液，经0.22μm微孔滤膜滤过后进样1μl测定峰面积，计算加样回收率。结果见表1。表1加样回收率实验结果

　　2.7.6样品含量测定取5个批次巴布剂成品，按上述方法制备成供试品溶液，精密吸取1μl注入气相色谱仪测定峰面积，按内标法计算其中丁香酚含量。结果见表2。表2样品含量测定结果

　　3讨论

　　供试品溶液制备曾采用甲醇浸提的方法，所得供试液不仅体积大，杂质成分多，巴布剂基质中甘油也被一并提出，影响气相色谱柱寿命。选用挥发油提取法制备供试品溶液，操作重复性好，5h内各组分提取率亦可接近100%，且含量测定杂质无干扰，可有效控制制剂质量。研究中曾尝试使用正十六烷、环已酮作内标，由于色谱峰分离效果和保留时间不合适等原因未予采用。本研究不仅在同一气相色谱条件下测定了跌打止痛巴布剂中多个挥发性成分的含量，更重要是为外用膏贴剂型挥发性成分的含量控制提供方法学参考。